PEI和超声微泡靶向释药介导siRNA转染对人子宫内膜癌细胞PpIX积蓄的比较研究

发布时间：2018-01-03 09:21

  本文关键词：PEI和超声微泡靶向释药介导siRNA转染对人子宫内膜癌细胞PpIX积蓄的比较研究　出处：《暨南大学》2016年硕士论文　论文类型：学位论文

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【摘要】：目的通过建立子宫内膜癌动物模型,使用活体小动物成像系统,分别检测使用多聚阳离子聚乙烯亚胺和超声微泡靶向技术介导si RNA转染,联合小剂量5-氨基酮戊酸后瘤体内原卟啉Ⅸ蓄积所致的荧光强度,探讨超声微泡靶向技术代替转染剂在子宫内膜癌光动力学诊断的应用价值。方法1胶原酶消化法分离人子宫内膜间质细胞(emdometrial stromal cell,ESC),并常规培养。2 MTT法检测PEI对ESC的增殖毒性。3 N-甲基-N-硝基-N-亚硝基+雌激素组合法诱导ICR小鼠子宫内膜原位肿瘤和培养扩增HEC-1-A细胞系后通过接种法构建裸鼠人子宫内膜癌移植瘤模型。4活体小动物成像系统检测系列浓度5-氨基酮戊酸(5-aminolevulinic acid,ALA)在子宫内膜癌动物模型上的作用特点。5以多聚阳离子聚乙烯亚胺(Polyethylenimine,PEI)和超声辐照脂质微泡或单独或联合介导荷瘤裸鼠亚铁螯合酶(ferrochelatase,FECH)-si RNA转染,敲减肿瘤组织的FECH,然后分别联合瘤体局部注射小剂量ALA。6应用活体小动物成像系统检测各处理组裸鼠的原卟啉Ⅸ(protoporphyrin,PpⅨ)荧光强度变化。7荧光显微镜检测各处理组裸鼠的瘤体冰冻切片的原卟啉Ⅸ荧光强度变化。8荧光分光光度计半定量检测各组处理后裸鼠的瘤体的原卟啉Ⅸ的含量变化。9病理检测FECH-si RNA转染后的各组裸鼠的非靶向器官。结果1体外实验PEI对ESC的增殖有毒性作用,IC50为9.461±0.081μg/ml。2实验9个月时ICR小鼠子宫内膜发生复杂性增生,实验18个月时子宫内膜发生癌变。31只裸鼠细胞种植后一次全部成瘤,无死亡。3 ICR小鼠子宫内膜原位肿瘤模型不适用于活体小动物成像系统荧光检测。裸鼠人子宫内膜癌移植瘤模型适用。4裸鼠单独ALA给药6.251mg/Kg剂量以上时才检测到明显荧光,但瘤体和周围组织无区别;50mg/Kg以上剂量瘤体部位荧光才与周围部位有明显区别。5 si RNA转染瘤体后,联用1mg/Kg ALA,PpⅨ荧光明显比单用1mg/Kg ALA增强(P0.05),转染效率:PEI联合超声辐照超声微泡PEI超声辐照超声微泡。6分别使用PEI、超声辐照超声微泡、si RNA后(均无转染作用),各再联用1mg/Kg ALA,裸鼠瘤体PpⅨ荧光未比单用1mg/Kg ALA增强(P0.05)。7荧光显微镜检测结果与活体小动物成像系统检测结果一致。转染三组和单用1mg/Kg ALA组荧光强度差别明显(P0.05)。无转染三组裸鼠瘤体切片和单用1mg/Kg ALA组镜下荧光强度无区别(P0.05)。8荧光分光光度计半定量检测瘤体提取物PpⅨ含量,转染三组和单用1mg/Kg ALA组差别明显(P0.05)。9 FECH-si RNA转染后的各组裸鼠的非靶向器官完整,未见出血、炎性细胞浸润和水肿情况。结论1体外实验PEI对正常人ESC有较大毒性作用,IC50为9.461±0.081μg/ml。2 N-甲基-N-硝基-N-亚硝基+雌激素组合诱导ICR小鼠子宫内膜原位肿瘤是可行的,但喂养雌激素时间需大于9个月,大于文献报道时间。3以PEI作为载体,介导FECH-si RNA转染裸鼠子宫内膜癌移植瘤的RNAi技术可下调FECH表达,增强外源性小量ALA应用时的PpⅨ红色荧光强度。4超声辐照脂质微泡亦能介导FECH-si RNA转染裸鼠子宫内膜癌移植瘤并下调FECH的表达,增强外源性小量ALA应用时的PpⅨ红色荧光强度。但作用不如PEI。5 PEI、超声辐照脂质微泡及si RNA目前常用剂量对体内非靶向器官未发现损伤作用。6超声辐照脂质微泡可在一定程度上替代PEI作用,减少对正常细胞的毒性作用。
[Abstract]:Objective To establish an animal model of endometrial carcinoma , and to detect the fluorescence intensity of the nude mice by using polycationic polyethylene imine ( PEI ) and ultrasonic microbubble targeting technique . It is feasible to induce the in situ tumor of ICR mice with IC50 of 9.461 卤 0.081 渭g / ml . 2 N - methyl - N - nitro - N - nitrite + estrogen combination can downregulate the expression of FECH and enhance the expression of FECH .

【学位授予单位】：暨南大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2016
【分类号】：R737.33

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本文编号：1373285