利用大肠杆菌和烟草表达的重组全人源药用抗EGFR单链抗体的抗肿瘤分析

发布时间：2018-01-08 09:38

  本文关键词：利用大肠杆菌和烟草表达的重组全人源药用抗EGFR单链抗体的抗肿瘤分析　出处：《聊城大学》2015年硕士论文　论文类型：学位论文

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【摘要】：表皮生长因子受体(Epidermal Growth Factor Receptor,EGFR)是肿瘤治疗中一个很重要的靶分子,针对EGFR靶点的抗体药物的研究具有广阔的前景。sc Fv是一种小分子抗体片段,其免疫原性较小,已逐渐成为抗体靶向治疗的重要研究方向。目前,虽然动物细胞表达抗体时,抗体活性高,但生产成本高。原核生物反应器可以有效的解决生产成本高的缺陷,但是其仍存在不足之处,它不能对翻译后的蛋白进行修饰,因而只适合表达Fv,sc Fv、Fab等抗体。植物生物反应器可以解决以上两者的缺陷,被认为是一种生产成本低、蛋白活性高的生物反应器。如已经有多种Fab、sc Fv等都已在植物中成功地表达。抗体经历了鼠源抗体,人源化抗体和全人源抗体三个阶段,全人源sc Fv能很大程度的消减HAMA反应。乳腺癌是常见的恶性肿瘤。抗EGFR单克隆抗体具有抑制乳腺癌MCF-7细胞增殖的作用。本试验采用生物信息方法对HLL和LLH基因序列进行构建,并预测这两种蛋白的性质。构建了p ET-28a-c(+)-HLL、p ET-28a-c(+)-LLH表达载体;利用E.coli生产HLL-p ET和LLH-p ET蛋白,并分析其抗肿瘤活性。构建了p BI121-HLL-YC表达载体;利用烟草生产HLL-YC蛋白,并对其进行了Western Blotting检测。为了提高目的蛋白在烟草中的表达量和生物活性,构建了HLL-YCPH-YC和LLH-YCPH-YC基因序列。研究结果如下:1.HLL、LLH的生化指标都与可溶性sc Fv相符,但只有HLL与可溶性sc Fv有相似的空间结构。2.构建了p ET-28a-c(+)-HLL、p ET-28a-c(+)-LLH表达载体,表达了HLL-p ET和LLH-p ET蛋白。HLL-p ET对MCF-7有显著的增殖抑制作用,具有生物活性。LLH-p ET对MCF-7无显著的增殖抑制作用,不具有生物活性。3.构建了p BI121-HLL-YC表达载体,表达了HLL-YC蛋白。4.构建了HLL-YCPH-YC和LLH-YCPH-YC抗体基因序列,为了提高目的蛋白在烟草中的表达量和生物活性奠定了基础。
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本文编号：1396603