突变型p53与HSP70和HSP90的相互作用的研究

发布时间：2018-01-14 23:33

  本文关键词：突变型p53与HSP70和HSP90的相互作用的研究　出处：《湖南师范大学》2015年硕士论文　论文类型：学位论文

  更多相关文章： p53R273H HSP70 HSP90 蛋白质相互作用 质谱分析

【摘要】：TP53基因编码一种分子量为53kDa的蛋白质,命名为p53。TP53基因的失活对肿瘤形成起重要作用。在所有恶性肿瘤中,50%以上会出现该基因的突变。TP53突变大多是由于单个氨基酸发生替换而导致的错义突变。突变p53蛋白依然保留着全长序列,但是功能上却从抑癌基因转变为癌基因。热休克蛋白(HSP)是生物受到环境中物理、化学、生物、精神等刺激时发生应激反应而合成的蛋白质,是一类高度保守的蛋白质,普遍存在于原核和真核生物中。HSP家族的功能十分重要,主要作为分子伴侣、影响细胞凋亡、参与免疫和提高细胞耐热性。在本文中,我们首先通过免疫共沉淀结合质谱分析的方法在含有p53R273H突变体的乳腺癌细胞MDA-MB-468中鉴定与p53R273H相互作用的蛋白质,一共鉴定到59个与p53R273H相互作用的蛋白。其中有9个蛋白为热休克蛋白,其中属于HSP70家族的有HSP70A2、HSP70A5、HSP70A6、HSP70A7、HSP70A8、HSP70A1L,属于HSP90家族的为HSP90AA1、HSP90AB1、HSP90B1。然后,我们研究HSP70和HSP90对p53R273H蛋白功能的影响。我们将HSP90-AB1表达质粒和一个HSP70-A5表达质粒与p53R273H表达质粒共转入Hek293细胞中,然后检测p53R273H蛋白的稳定性。结果表明,HSP70和HSP90都能增强p53R273H的稳定性,而且HSP70与HSP90共转染比单独转染一种质粒时p53R273H的稳定性更好。而用HSP70的抑制剂Pifithrin-μ或/和HSP90的抑制剂17-AAG处理MDA-MB-468细胞,则促进p53R273H蛋白的降解。进一步研究表明,在MDA-MB-468细胞中干扰p53R273H突变体抑制细胞增殖,用HSP70的抑制剂Pifithrin-μ或/和HSP90的抑制剂17-AAG处理MDA-MB-468细胞,抑制细胞增殖和迁移、促进细胞凋亡。这些结果说明,HSP70和HSP90可能通过与p53R27H蛋白的相互作用、促进p53R27H蛋白的稳定,从而促进细胞增殖、抑制细胞凋亡。
[Abstract]:TP53 gene encodes a 53kDa protein named inactivation of p53.TP53 gene which plays an important role in tumor formation. More than 50% mutation. TP53 mutation of the gene is mostly caused by a single amino acid replacement resulting in missense mutation. The mutant p53 protein still retains the full-length sequence. Heat shock protein (HSPs) is a kind of protein which is synthesized by the stress reaction in the environment when the organism is stimulated by physical, chemical, biological, spiritual and other stimuli, but the function is changed from the tumor suppressor gene to the oncogene. HSPs are a class of highly conserved proteins. The function of HSP family is very important in prokaryotes and eukaryotes. It mainly acts as a molecular chaperone and affects cell apoptosis. Participate in immunization and improve cell heat resistance. In this article. We first identified proteins interacting with p53R273H in MDA-MB-468 of breast cancer cells containing p53 R273H mutant by immunoprecipitation and mass spectrometry. . A total of 59 proteins interacting with p53R273H were identified, of which 9 proteins were heat shock proteins, including HSP70A2HSP70A5 belonging to the HSP70 family. HSP70A6, HSP70A7, HSP70A8, HSP70A1L, and HSP90AA1, HSP90AB1, belonging to HSP90 family. HSP90B1. and... We studied the effects of HSP70 and HSP90 on the function of p53R273H protein. We combined HSP90-AB1 expression plasmid and a HSP70-A5 expression plasmid with p53R27. 3H expression plasmid was co-transfected into Hek293 cells. The stability of p53R273H protein was determined. The results showed that both HSP70 and HSP90 could enhance the stability of p53R273H. Moreover, the stability of p53R273H by co-transfection of HSP70 and HSP90 was better than that of p53R273H transfected with a plasmid alone. The inhibitor of HSP70, Pifithrin- 渭 or / and HSP9, was used as the inhibitor of p53R273H. MDA-MB-468 cells were treated with 17-AAG. Further studies showed that the p53R273H mutant interfered with the proliferation of MDA-MB-468 cells. MDA-MB-468 cells were treated with HSP70 inhibitor Pifithrin- 渭 or / and HSP90 inhibitor 17-AAG to inhibit cell proliferation and migration. These results suggest that HSP70 and HSP90 may promote the stability of p53R27H protein by interacting with p53R27H protein and thus promote cell proliferation. Inhibit apoptosis.
【学位授予单位】：湖南师范大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：R730.2

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本文编号：1425841