益气除痰方干预下DLBCL血清轻链检测及调控DLBCL生长的机制研究

发布时间：2018-01-26 17:36

本文关键词： 益气除痰方弥漫大B细胞淋巴瘤血清轻链凋亡信号通路　出处：《广州中医药大学》2016年博士论文　论文类型：学位论文

【摘要】：目的：评价益气除痰方联合化疗一线治疗DLBCL的疗效,并对DLBCL患者进行血清轻链(sTLC)检测,一方面验证sTLC水平在DLBCL中的疗效预测和预后价值,另一方面观察益气除痰方对sTLC水平变化的影响。观察益气除痰方对于DLBCL的体外、体内抑瘤活性及机制,并初步探讨益气除痰方对KT/mTOR信号通路的调控作用。方法：入组广州中医药大学第一附属医院及中山大学附属肿瘤医院2014年3月至2015年5月期间确诊并行一线化疗的DLBCL病例共46例。广州中医药大学第一附属医院收治患者接受益气除痰方联合CHOP±R方案治疗(试验组)。中山大学附属肿瘤医院收治患者仅接受CHOP±R方案治疗(对照组)。收集上述46例DLBCL患者在化疗前、1程化疗后、2程化疗后、3程化疗后及4程化疗后共5次血标本,采用散射比浊法测定血清sTLC(κ或λ)、IgG、IgA、IgM。通过统计学处理比较两组之间治疗效果及血清学指标变化的差异,并分析血清学指标与预后的关系。将人DLBCL淋巴瘤细胞株OCI-1y10和SUDHL-6细胞进行培养传代,CCK-8法观察益气除痰方对肿瘤细胞生长的抑制作用,流式细胞(Annexin V-FITC/PI)染色检测益气除痰方诱导DLBCL细胞凋亡的能力。Western blot法检测益气除痰方对DLBCL细胞株AKT及pAKT、pS6、pPRAS40及pGSK表达的影响。构建BALB/c-nu裸小鼠DLBCL荷瘤模型,给予益气除痰方处理后观察测量肿瘤体积,测量瘤体重量,计算肿瘤抑制率,并通过免疫组化检测移植瘤AKT/mTOR信号通路调控蛋白的表达。结果：DLBCL中痰瘀互结型患者最多,占所有患者的64.0%。46例患者总客观有效率为80.4%,2年OS和PFS分别为92.7%和79.6%。试验组和对照组在客观有效率、OS和PFS方面无明显区别。试验组与对照组相比,白细胞下降等骨髓抑制毒副反应更轻(P=0.048)。sTLC检测发现血清κ轻链升高的患者占19.6%,血清λ轻链升高的患者占17.4%,κ轻链水平升高与多器官累及(P=0.01)有关。λ轻链(P=0.029)及κ+λ(P=0.002)2项指标水平升高均与OS降低有关,是不良的预后因素;进一步分析sTLC对PFS的影响,发现κ轻链(P=0.044)水平升高与PFS下降有关。多因素预后分析发现,κ轻链水平升高是影响PFS的独立预后指标(P=0.031)。试验组和对照组的sTLC变化趋势进行对比分析,发现κ、λ、κ+λ曲线总体呈逐渐下降趋势(P0.001),在4程化疗后达到最低点。试验组与对照组相比,对λ轻链曲线下降的影响更加显著(P=0.041)。细胞实验结果显示,益气除痰方对DLBCL细胞株OCI-ly10和SUDHL-6具有生长抑制作用,且具有一定的时间依赖性和浓度依赖性。流式细胞检测中,低、中、高浓度中药组均发现淋巴瘤细胞存在凋亡,且凋亡率逐渐升高,其中高浓度中药组较阴性对照组凋亡率明显升高(P0.05)。Western blot结果发现益气除痰方可显著降低OCI-ly10和SUDHL-6细胞系pAKT及其底物pGSK,mTOR通路相关分子pS6和pPRAS40的表达。动物实验结果显示,中药、阿霉素组和联合组移植瘤瘤体积和瘤重均较对照组小(P0.001),联合组的抑瘤率(47.3%)高于中药(26.4%)和阿霉素组(31.2%)。免疫组化结果显示中药组pAKT.pAKT.pGSK和pS6蛋白表达均低于对照组,两组之间的差别具有显著性意义(P=0.05;P=0.011；P=0.004;P=0.02).结论：在本研究中,我们发现初治的DLBCL患者在CHOP±R方案化疗的基础上加用益气除痰方,可以减轻骨髓抑制的毒副反应：sTLC检测与临床特征分析发现血清κ轻链是DLBCL患者不良的预后因素,并且是影响PFS的独立预后指标。化疗期间患者κ、λ、κ+λ变化曲线提示sTLC可以反映肿瘤负荷的变化趋势。试验组与对照组相比,对λ轻链曲线下降的影响更加显著,说明在化疗基础上加用益气除痰方肿瘤负荷的下降可能更明显。细胞和动物实验发现,益气除痰方可以抑制DLBCL细胞系的生长,具有一定的时间依赖性和浓度依赖性,其作用机制与促进肿瘤细胞凋亡有关。益气除痰方通过抑制AKT/mTOR信号通路中关键蛋白pAKI及其底物pGSK,mTOR通路相关分子pS6和pPRAS40来发挥调控DLBCL生长的作用。
[Abstract]:Objective : To evaluate the therapeutic effect of Yiqijiatan Fang combined with chemotherapy on the expression of serum light chain ( sTLC ) . The results showed that the tumor volume and tumor weight were significantly lower than those in the control group ( P = 0 . 05 ; P = 0 . 011 ; P = 0.004 ; P = 0.02 ) . Conclusion : In this study , we find that the patients with primary treatment of DLCIs can reduce the toxic side effects of bone marrow suppression on the basis of CHOP 卤 R regimen chemotherapy .

【学位授予单位】：广州中医药大学
【学位级别】：博士
【学位授予年份】：2016
【分类号】：R733.1

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