RNA干扰沉默DcR3对人胰腺癌细胞化疗药物敏感性影响的实验研究

发布时间：2018-02-02 05:52

  本文关键词： 诱骗受体- RNA干扰 胰腺癌 凋亡 化疗敏感性　出处：《中国癌症杂志》2017年11期 　论文类型：期刊论文

【摘要】：背景与目的:大部分胰腺癌具有高表达诱骗受体-3(decoy receptor 3,Dc R3)的特征,而后者与Fas L凋亡途径相关,可能导致胰腺癌对化疗耐药。该研究旨在探讨RNA干扰沉默Dc R3基因对人胰腺癌细胞化疗药物敏感性的影响及其可能机制。方法:构建带有Dc R3-si RNA序列的稳定表达质粒,通过LipofectamineTM2000转染至人胰腺癌细胞As PC-1细胞株,筛选出转染后稳定低表达Dc R3的胰腺癌细胞,同时设未转染对照组(control组)和转染阴性质粒对照组(mock组)。应用ELISA和蛋白[质]印迹法(Western blot)检测各组As PC-1细胞中Dc R3的蛋白表达;MTT实验检测各组As PC-1细胞对吉西他滨的敏感性;流式细胞术检测各组As PC-1细胞凋亡情况;Western blot和实时荧光定量聚合酶链反应(real-time fluorescent quantitative polymerase chain reaction,RTFQ-PCR)检测各组As PC-1细胞中Fas L、Caspase-8、Caspase-3蛋白和m RNA的表达。结果:转染Dc R3-si RNA后As PC-1细胞中Dc R3蛋白较其他对照组明显降低;转染Dc R3-si RNA后As PC-1细胞对吉西他滨的敏感性显著增加;沉默Dc R3基因可以上调Fas L、Caspase-8和Caspase-3的表达并促进吉西他滨诱导的细胞凋亡。结论:RNA干扰沉默Dc R3基因可激活Fas L/Caspase凋亡途径,促进肿瘤细胞凋亡,增加人胰腺癌As PC-1细胞对化疗药物的敏感性。
[Abstract]:Background & AIM: most pancreatic carcinomas are characterized by high expression of decoy receptor 3DcR3, which is associated with Fas L apoptosis pathway. The aim of this study was to investigate the effect of RNA interference silencing DC R3 gene on chemosensitivity of human pancreatic cancer cells and its possible mechanism. The stable expression plasmid of R3-si RNA sequence. Human pancreatic cancer cells as PC-1 cells were transfected with LipofectamineTM2000, and stable and low expression of DC R3 was obtained after transfection. At the same time, the control group without transfection and the control group with negative plasmid transfection were divided into two groups. ELISA and protein were used. [The protein expression of DC R3 in as PC-1 cells was detected by Western blot. The sensitivity of as PC-1 cells to gemcitabine was detected by MTT assay. Apoptosis of as PC-1 cells was detected by flow cytometry. Western blot and Real-time fluorescence quantitative Polymerase chain reaction. Real-time fluorescent quantitative polymerase chain reaction. RTFQ-PCR was used to detect Fas Lncaspase-8 in as PC-1 cells. Results: after transfection of DC R3-si RNA, the expression of DC R3 protein in as PC-1 cells was significantly lower than that in other control groups. The sensitivity of as PC-1 cells to gemcitabine was significantly increased after transfection of DC R3-si RNA. Silencing DC R3 gene could up-regulate Fas L. The expression of Caspase-8 and Caspase-3 and the apoptosis induced by gemcitabine. Conclusion the silencing of DC R3 gene by Caspase-8 interference can activate Fas. L- caspase apoptosis pathway. Promote apoptosis of human pancreatic cancer cells and increase the sensitivity of as PC-1 cells to chemotherapeutic drugs.
【作者单位】： 湘南学院附属医院肿瘤防治中心;美国密苏里大学医学院Ellis
【基金】：湖南省自然科学基金(14JJ3136) 郴州市科技局科研基金(CZ2013096)
【分类号】：R735.9
【正文快照】： 胰腺癌是一种临床表现隐匿、发展迅速、德国QIAGEN公司,ELISA检测试剂盒购自美预后极差的消化道恶性肿瘤,由于胰腺癌早期国Bio-Techne公司,Dc R3、β-actin、Caspase-8症状隐匿,诊断困难,因而存活率极低[1]。化和Caspase-3抗体购自美国Cell Signaling疗是其重要的治疗方法,然

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本文编号：1483777