新合成σ1受体配体化合物对宫颈癌细胞生长抑制及化疗增敏作用

发布时间：2018-02-03 14:41

本文关键词： 子宫颈肿瘤宫颈癌细胞σ1受体配体增敏 TCGA　出处：《郑州大学》2017年硕士论文　论文类型：学位论文

【摘要】：背景及目的宫颈癌(Cervical Cancer,CC)是目前全球女性中第四大常见的恶性肿瘤。随着癌前筛查的不断普及和新治疗策略的发现,虽然宫颈癌发病率和死亡率出现一定程度下降,但仍然存在大量转移性或复发性宫颈癌。对于这类不适合手术和放射治疗的患者,姑息性化疗依然是主要的治疗方法。由于已应用的化疗药物疗效有限,开发新的生物分子靶向治疗药物是近年来的研究热点之一,其中以σ1受体为靶点的抗肿瘤治疗药物逐渐引起研究者的关注。σ1受体(σ1 Receptor,σ1R)是非鸦片类受体类的跨膜蛋白,分布于哺乳动物体内的多种器官组织包括脑、眼底、角膜、肝脏、血管细胞等及多种肿瘤中。σ1R蛋白主要定位在线粒体相关的内质网膜(Mitochondria-associated ER Membrane,MAM)上,在激动剂或应激刺激下可转位至细胞膜、核膜。σ1R被证明是分子伴侣,通过伴侣不同的功能蛋白而参与调节人体多种生理功能和疾病,如神经退行性病变(如帕金森病)、精神障碍(如抑郁症)及中枢系统和外周的肿瘤。σ1R高选择性的配体药物有潜力用于对该受体相关疾病的诊断和治疗。本研究检测了σ1R在宫颈癌细胞系中的表达情况,分析TCGA(The Cancer Genome Atlas)σ1R mRNA水平与宫颈癌患者临床病理特征及预后的关系,而且检测宫颈癌手术前后血浆中σ1R蛋白变化,由此探讨σ1R在宫颈癌的临床诊断、治疗及预后评估的价值;另外,合成新σ1R选择性配体化合物,检测其对宫颈癌细胞株的生物学行为影响,为开发新型的宫颈癌靶向性分子诊断和药物治疗提供依据。材料及方法利用免疫细胞化学染色检测σ1R蛋白在宫颈癌细胞中的定位和组织表达情况。从TCGA(https://genome-cancer.ucsc.edu/)数据库下载经预处理的宫颈癌基因mRNA-HiSeqV2(2015-02-24)数据包,统计分析宫颈癌σ1R表达水平与临床病理特征和预后的关系。蛋白印迹法检测宫颈癌患者手术前后外周血中σ1R相对水平。检测新合成的4种σ1R特异性配体化合物对宫颈癌HeLa和Siha的生物学行为影响:四甲基偶氮唑蓝(MTT)比色法检测σ1R配体化合物对HeLa、Siha细胞生长的抑制作用及对奈达铂的敏感性影响,细胞划痕实验观察配体化合物细胞迁移能力影响,流式细胞仪检测14a化合物对HeLa和Siha细胞周期和凋亡率的影响。结果1.细胞免疫化学染色显示,σ1R在宫颈癌细胞系HeLa和Siha细胞均有表达,且定位在胞浆和胞核。2.TCGA宫颈癌资料分析显示:鳞癌中σ1R表达水平与年龄(P=0.005)相关,腺癌中σ1R高表达与临床分期(P=0.020)、淋巴结转移(P=0.004)、脉管浸润(P=0.018)相关。鳞癌中σ1R高表达者预后差但差异缺乏统计学意义,腺癌中σ1R高表达者平均生存期[(35.5±10.5)月]显著低于低表达者[(95.4±15.0)月](P=0.034)。3.Western blot显示:宫颈癌患者外周血中σ1R水平在术后10天显著低于术前(P0.01)。4.MTT显示,4种化合物均呈时间和浓度依赖性抑制细胞增殖(所有P0.01),化合物14a、14e、15c、15f对HeLa和Siha细胞生长抑制IC50值分别为37.2、41.6、133.7、28.0μmol/L和26.8、28.4、112.9、13.8μmol/L。5.对奈达铂敏感性影响:6μmol/L的14a联合不同质量浓度NDP作用于细胞48h,HeLa细胞:联合组0.1~10μg/ml奈达铂作用后细胞增殖的抑制率明显高于单药组(P0.01);Siha细胞:联合组0.1~30μg/ml奈达铂作用后细胞增殖的抑制率明显高于单药组(P0.01)。6.化合物对细胞迁徙的影响:30μmol/L的14a作用于HeLa、Siha细胞24h时,实验组迁移率分别为(19.6±0.6)%、(15.8±0.8)%,均明显小于相应对照组(43.0±1.2)%、(29.3±1.0)%(均为P0.01)。7.流式细胞分析显示:30μmol/L的14a作用于时HeLa、Siha细胞48h后,HeLa、Siha细胞总凋亡率分别为(16.30±1.13)%、(21.27±1.86)%,分别显著高于未加化合物组(1.80±0.27)%、(2.75±0.21)%(均为P0.01);化合物组G0/G1期细胞比例均显著增加(PHeLa=0.032,PSiha=0.042)。结论1.σ1R在宫颈癌细胞系HeLa和Siha的胞浆和胞核中均有表达。2.血浆σ1R水平有可能作为监测宫颈癌治疗效果的标志物。3.新合成的σ1配体化合物呈浓度和时间依赖性显著地抑制子宫颈癌HeLa和Siha细胞的增殖。4.σ1R配体化合物14a可抑制HeLa和Siha细胞的迁移能力。5.σ1R配体化合物14a在低浓度下明显增加宫颈癌细胞对奈达铂的敏感性。6.σ1R配体化合物14a可能通过凋亡诱导途径和细胞周期G1期阻滞发挥抗肿瘤作用。
[Abstract]:BACKGROUND & OBJECTIVE : Cervical cancer ( CC ) is the fourth most common malignant tumor among women in the world . The results showed that the expression level of 蟽1R in peripheral blood was significantly lower than that in single drug group ( P = 0.034 ) .

【学位授予单位】：郑州大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2017
【分类号】：R737.33

【参考文献】