基于乳腺癌分子分型的TOP2A、XRCC1基因检测及临床病理特征的相关性研究

发布时间：2018-02-27 00:31

本文关键词： 乳腺癌分子分型 TOP2A XRCC1 临床病理　出处：《山东大学》2016年博士论文　论文类型：学位论文

【摘要】：乳腺癌(Breast Cancer, BC)是女性常见恶性肿瘤之一。据报道近10年来我国乳腺癌的总体发病率上升了47%。乳腺癌已经成为我国女性发病率最高的恶性肿瘤之一。乳腺癌的治疗与许多恶性肿瘤一样,是以手术为主的综合治疗。乳腺癌尽管通过包括手术、化疗、放疗、内分泌治疗及靶向治疗在内的综合治疗,可以显著降低患者术后的复发转移率,但仍有30%左右患者出现复发转移。究其原因,乳腺癌的局部治疗。手术、放疗和全身治疗-化疗、内分泌、靶向治疗虽然根据NCCN指南有章可循,但是因肿瘤的异质性导致治疗上的不确定性。对于乳腺癌的全身化疗有效的化疗药物较多,包括蒽环类、紫杉类、铂类等,如何选择最佳化疗方案,减少不必要的化疗损伤十分重要。临床医生在制定化疗方案时虽有治疗指南,但选择空间不大。在提倡精准医疗的今天,如何依据每位乳癌患者的分子生物学特性选择合理的化疗药物,在获得最佳疗效的同时使治疗副作用降到最低是困扰临床医生的难点课题。解决这一难题的一个基础就是明确乳腺癌患者对药物的敏感性。循证医学已经表明,蒽环类药物是乳腺癌化疗的一线基础用药,而铂类是继蒽环类和(或)紫杉类药物治疗失败之后常常选择的药物,本研究基于乳腺癌最新St.Gallen共识中的分子分型,检测TOP2A(蒽环类药物耐药基因)、XRCC1(铂类药物耐药基因)表达差异及与临床病理参数进行综合分析,为乳腺癌的临床基础研究、乳腺癌患者的个体化精准治疗等方面提供参考依据。同时,对目前临床治疗难点分型-三阴型乳腺癌进行XRCC1 Arg194Trp基因多态性分析及蛋白表达研究进一步了解乳腺癌耐药的发生发展原因。本研究分两部分进行：第一部分:TOP2A在乳腺癌不同分子分型中的表达及临床意义乳腺癌是一组具有显著异质性的肿瘤,不同分子分型的乳腺癌其临床特点、治疗效果以及预后均存在一定的差异。HER2过表达型虽然可采用靶向药物治疗,但临床仅有1/3的患者对其敏感且容易出现耐药性；三阴型患者则缺乏特异性治疗,预后较差。因此,对不同分子亚型乳腺癌发病机制的研究将有助于临床制定个体化的治疗方案,提高生存率。已有研究显示,TOP2A与乳腺癌的发生、发展及耐药均有关。目前对不同分子亚型乳腺癌患者TOP2A表达与其相关性的研究报道少见。现通过对不同分子亚型乳腺癌组织中TOP2A表达及临床病理的相关性进行研究,旨在对不同分子亚型乳腺癌,特别是HER2过表达型、三阴型乳腺癌发病机制及个体化治疗提供新的思路和有意义的实验依据。目的：探讨TOP2A在不同分子亚型乳腺浸润性导管癌患者癌及癌旁组织中的表达、临床意义、mRNA和蛋白水平表达的相关性及与临床病理特征相关性研究。方法：采用RT-PCR法检测TOP2AmRNA在乳腺癌组织及癌旁组织中的表达差异,免疫组化法检测TOP2A蛋白在乳腺癌组织中表达高低；采用免疫组化法检测乳腺癌细胞ER、PR及Ki-67表达状态,应用免疫组化法和FISH法检测HER2状态。基于最新St.Gallen国际共识,把乳腺癌分为Luminal A, Luminal B, HER2过表达及三阴型四种分子亚型,根据各分型的生物学行为特点,分组讨论TOP2AmRNA和蛋白水平表达的差异以及二者之间的关系。进一步统计分析TOP2A蛋白高表达率与患者年龄、肿瘤大小、病理分级、腋窝淋巴结有无转移、ER、PR、HER-2以及Ki-67表达之间的关系。结果：118例乳腺癌配对资料中,TOP2A mRNA表达量在乳腺癌组织中比癌旁组织明显增高(p0.05)；乳腺癌各分子分型之间TOP2AmRNA表达水平的多重比较,发现TOP2A mRNA过表达在Luminal B型和HER2过表达型中更常见；TOP2A蛋白高表达也在Luminal B型和HER2过表达型中更常见,TOP2A蛋白表达与mRNA表达结果一致；TOP2A mRNA水平与蛋白水平表达呈正相关关系,具有统计学意义(p0.001, r=0.704)。TOP2A蛋白高表达率与年龄、PR表达状况无明显相关(p0.05)；与肿瘤大小、腋窝淋巴结阳性、组织学分级、ER阳性、HER-2基因扩增、Ki-67表达相关(p0.05)结论：1、本研究进一步验证了TOP2A mRNA在乳腺癌组织中明显高表达,TOP2A蛋白高表达在HER2过表达型和三阴型比预后相对较好的Luminal分型中更常见,从分子生物学层面证实TOP2A与乳腺癌发病机制相关。2、乳腺癌分子分型中,TOP2A基因mRNA及蛋白水平高表达在LuminalB型和HER2阳性型中更常见,且二者结果呈正相关,可以考虑采用简单实用的免疫组化法检测TOP2A表达来代替mRNA检测,符合St.Gallen共识建议采用免疫组化法进行乳腺癌分子分型的主张。对TOP2A在该两型乳腺癌中的深入研究将对阐明乳腺癌浸润性转移机制及寻找新的治疗靶点提供实验依据。3、TOP2A的表达与肿瘤的大小、腋窝淋巴结转移情况、组织学分级、ER阳性、HER2扩增、Ki67表达高低呈正相关,因此TOP2A基因的过表达可能促进乳腺癌的进展,进而与乳腺癌的恶性程度相关。4、TOP2A是蒽环类药物的耐药基因和检测标靶,在临床工作中通过IHC法检测TOP2A表达来作为蒽环类药物选用的依据。TOP2A不仅是蒽环类药物疗效的预测靶点,还很有可能如HER2一样,成为乳腺癌治疗的新靶点。第二部分：基于乳腺癌分子分型的XRCC1基因多态性及蛋白表达的研究乳腺癌是女性最常见的恶性肿瘤之一,乳腺癌的发生发展与遗传因素十分密切,寻找与乳腺癌预后相关的分子标志物对于乳腺癌的治疗具有重要的指导意义。X射线交叉互补修复基因1 (X-ray repair cross complementing groupl, XRCC1)是一种参与DNA损伤修复的重要基因,在维持基因组稳定性过程中起关键作用。XRCC1Arg194Trp位点多态性改变可能会影响XRCC1蛋白的正常功能,导致DNA修复能力降低,从而与多种肿瘤生物学行为、肿瘤易感性或化疗敏感性相关,本研究检测XRCC1 Arg194Trp位点基因多态性、XRCC1蛋白表达,以期了解与乳腺癌分子分型、临床病理特征的关系,结合已有文献报道,XRCC1是铂类药物耐药基因,本研究有助于进一步了解XRCC1在乳腺癌铂类药物的选择中的临床价值。目的：本实验通过对118例散发性乳腺癌XRCC1基因Arg194Trp多态性检测及XRCC1蛋白表达的研究,探讨XRCC1Arg194Trp及XRCC1蛋白表达在乳腺癌各分子分型中的表达差异、与临床病理参数的相关性、基因多态与蛋白表达之间的相关性,进而探讨其在乳腺癌铂类药物选择中的潜在价值。方法：随机收集山东省千佛山医院2014年3月-2015年12月期间术前未接受任何治疗的118例乳腺癌患者临床、病理资料,复阅病理切片,按照2015年St.Gallen共识进行分子分型。采用焦磷酸测序法检测该118例乳腺癌患者外周血中XRCC1 Arg194Trp多态性改变,应用免疫组化法检测乳腺癌组织中XRCC1蛋白表达情况,探讨XRCC1 Arg194Trp多态性、XRCC1蛋白表达在乳腺癌不同分子分型中的多态性分布、表达差异及与临床病理特征之间的关系。结果：1、XRCC1 (Arg194Trp)可见基因型：CC、CT、TT。本研究结果发现118例乳腺癌患者中CC基因型占53.39%(63/118),CT基因型占36.44%(43/118),TT基因型占10.17%(12/118)2、XRCC1Arg194Trp多态性与XRCC1蛋白表达之间无关(P0.05)3、XRCC1Arg194TrpCT/TT型在HER2和三阴型乳腺癌中更常见,而CC型在Luminal型乳腺癌中更常见(P0.05); XRCC1Arg194Trp位点多态性在LuminalA型和B型中无统计学差异(p0.05); XRCC1Arg194Trp位点多态性在LuminalA型和HER2过表达型或三阴型间均有统计学差异(p0.05)4、XRCC1蛋白表达在Luminal型乳腺癌与HER2过表达型/三阴型之间无统计学差异(p0.05),两组间无关联；XRCC1蛋白表达在LuminalA型与B型或HER2过表达型间无统计学差异(p0.05),而XRCC1蛋白表达在LuminalA型与三阴型之间有统计学差异(p0.05)。5、XRCC1 Arg194Trp多态性分布、XRCC1低表达与乳腺癌患者的年龄、肿瘤大小、肿瘤组织学分级均无显著性相关(p0.05),而与腋窝淋巴结转移、激素受体状态、HER2扩增状态、Ki67表达高低均显著性相关(P0.05)。6、XRCC1低表达与乳腺癌患者的年龄、肿瘤大小、肿瘤组织学分级无显著性相关(p0.05),而与腋窝淋巴结转移、激素受体状态、HER2扩增状态、Ki67表达高低呈显著性相关(P0.05)。结论：1、XRCC1Arg 194Trp多态性与XRCC1蛋白表达无关,说明XRCC1蛋白的表达不仅受XRCC1Arg 194Trp位点改变的影响,还可能存在其他位点的改变影响XRCC1蛋白表达。2、XRCC1Arg 194TrpCT/TT型(杂合／纯合突变型)在HER2阳性型、三阴型中更常见,结合药敏文献报道,建议铂类药物选用。3、XRCC1低表达在乳腺癌四种分子分型的三阴型中更常见,三阴型是乳腺癌中恶性程度最高,治疗效果最差的类型,建议对于三阴型乳腺癌免疫组化检测常规检测XRCC1蛋白,指导三阴型乳腺癌铂类化疗药物的选择。4、XRCC1Arg194Trp基因多态、XRCC1蛋白低表达分别与ER、PR、HER2、Ki67状态相关,可能与乳腺癌患者预后有关。
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【学位授予单位】：山东大学
【学位级别】：博士
【学位授予年份】：2016
【分类号】：R737.9

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