Let-7a及其靶基因HMGA2、Cyclin D1在上皮性卵巢癌中的表达

发布时间：2018-03-04 10:14

  本文选题：上皮性卵巢癌　切入点：let-7a　出处：《郑州大学》2017年硕士论文　论文类型：学位论文

【摘要】：背景和目的卵巢癌(ovarian cancer,OC)是妇科恶性肿瘤中死亡率最高的疾病,由于发病机制不明确、缺乏特异性的早期诊断标志物并常出现多药耐药(MDR),因此预后极差。其中上皮性卵巢癌(epithelial ovarian cancer,EOC)占所有卵巢癌的90%以上。微小RNA(micro RNA,mi RNA)是一类长约22个核苷酸的非编码RNA,近些年研究发现mi RNA与癌症的关系密切。在人类许多恶性肿瘤中发现了mi RNA的异常表达,先前的研究主要集中在细胞凋亡、细胞周期、血管生成、上皮间质转化(EMT)和化疗耐药方面。近来研究发现,从健康者和癌症患者体液循环中可以检测到mi RNA的稳定表达,预示着mi RNA可以作为一种新的诊断标志物,帮助癌症患者做到早期诊断与治疗。Let-7a作为let-7家族中的一员,是最早被发现的mi RNA之一,其在多种恶性肿瘤如乳腺癌、前列腺癌和胰腺癌中均表达下调,被认为是一种肿瘤抑制基因。高迁移率蛋白A2(high-mobility group AT-hook 2,HMGA2)和细胞周期调控因子D1(Cyclin D1,CCND1)作为let-7a的靶基因已被证实,let-7a通过与其3’-UTR结合抑制其转录翻译。HMGA2和Cyclin D1与恶性肿瘤的发生、组织学分型、分化、侵袭及预后存在密切关系。然而尚未见let-7a、HMGA2和Cyclin D1三者联合在EOC中的报道,本研究拟对EOC患者血浆中let-7a水平进行检测,探讨其能否成为EOC的潜在诊断标志物;研究EOC患者组织中let-7a和HMGA2、Cyclin D1的表达,探讨三者在EOC发生发展过程中的作用。材料与方法1.研究对象选取2014年9月至2016年5月于郑州大学第三附属医院手术切除的上皮性卵巢癌48例作为恶性组,良性卵巢上皮性肿瘤21例作为良性组,术前收集空腹肘静脉血浆2ml,术中收集肿瘤组织,术后均经病理证实。选取同时期于本院门诊行体检的23例健康女性作为正常健康组,收集空腹肘静脉血浆2ml。26例因子宫体等良性疾病同时行附件切除患者作为正常组,术中收集正常卵巢组织,术后经病理证实。所有人签署知情同意书,并经郑州大学第三附属医院伦理委员会批准。2.实验方法(1)采用q RT-PCR法检测正常健康组、良性组和恶性组血浆中let-7a的水平,同时检测正常组、良性组和恶性组组织中let-7a、HMGA2 m RNA和Cyclin D1m RNA的表达。(2)采用免疫组化SP法检测正常组、良性组和恶性组组织中HMGA2和Cyclin D1蛋白的表达和定位。3.统计学方法采用SPSS 21.0软件进行统计分析。正态分布的计量资料用x±s表示,两组定量资料采用独立样本t检验,多组定量资料采用单因素方差分析,方差不齐时采用Kruskal-Wallis检验。计数资料采用百分率表示,比较用χ2检验和Fisher精确概率法。相关性分析用Pearson法。检验水准α=0.05。组间两两比较时检验水准α′=α/比较次数=0.0167。结果1.血浆中let-7a的结果分析正常健康组、良性组和恶性组血浆中let-7a的水平分别为(2.046±0.734)、(1.858±0.317)和(1.329±0.610)。三组血浆中let-7a的水平相比,恶性组水平分别低于良性组、正常健康组,差异均有统计学意义(p0.01)。良性组水平低于正常健康组,差异无统计学意义(p0.05)。绘制let-7a的ROC曲线,曲线下面积(AUC)为0.826(95%置信区间:0.728~0.923,p0.001),当约登指数为1.975时敏感度为91.7%,特异性为65.2%。2.组织中let-7a、HMGA2和Cyclin D1 m RNA的表达Let-7a、HMGA2和Cyclin D1 m RNA在不同卵巢组织中的相对表达量发生显著变化。正常组、良性组和恶性组组织中let-7a的相对表达量分别为(5.045±4.435)、(4.178±2.856)和(2.144±2.048)。三组相比,恶性组分别低于良性组和正常组,差异均有统计学意义(p0.01);良性组低于正常组,差异无统计学意义(p0.05)。正常组、良性组和恶性组组织中HMGA2 m RNA的相对表达量分别为(1.040±1.107)、(1.516±1.088)和(6.667±5.139)。三组相比,恶性组分别高于良性组和正常组,差异均有统计学意义(p0.01);良性组高于正常组,差异无统计学意义(p0.05)。正常组、良性组和恶性组组织中Cyclin D1 m RNA的相对表达量分别为(1.138±0.838)、(1.384±1.207)和(3.355±2.358)。三组相比,恶性组分别高于良性组和正常组,差异均有统计学意义(p0.01);良性组高于正常组,差异无统计学意义(p0.05)。3.组织中let-7a与上皮性卵巢癌临床病理特征关系恶性组组织中let-7a在FIGO I-II期和III-IV期的相对表达量分别为(2.920±2.352)和(1.679±1.720),随病理分期进展相对表达量下降,差异具有统计学意义(p0.05);淋巴结无转移和有转移的相对表达量分别为(3.029±2.207)和(1.564±1.740),有淋巴结转移患者相对表达量下降,差异具有统计学意义(p0.05)。而与年龄、分化程度与组织学类型均无关(p0.05)。4.Let-7a和HMGA2、Cyclin D1 m RNA的相关性分析经Pearson相关分析显示,恶性组组织中let-7a与HMGA2 m RNA的相对表达量呈负相关(r=-0.729,p0.05),与Cyclin D1 m RNA的相对表达量呈负相关(r=-0.735,p0.05)。Let-7a在血浆和组织中的表达无明显相关性(r=0.163,p=0.270)。5.HMGA2和Cyclin D1蛋白的表达和定位正常组、良性组和恶性组组织中HMGA2蛋白的阳性表达率分别为26.9%(7/26)、47.6%(10/21)、85.4%(41/48)。三组相比,恶性组分别高于良性组和正常组,差异均有统计学意义(p0.01);良性组高于正常组,差异无统计学意义(p0.05)。正常组、良性组和恶性组组织中Cyclin D1蛋白的阳性表达率分别为30.8%(8/26)、52.4%(11/21)、81.3%(39/48)。三组相比,恶性组分别高于良性组和正常组,差异均有统计学意义(p0.01);良性组高于正常组,差异无统计学意义(p0.05)。HMGA2和Cyclin D1蛋白均表达在细胞核内。6.HMGA2和Cyclin D1蛋白与上皮性卵巢癌临床病理特征关系恶性组组织中HMGA2蛋白在FIGO I-II期和III-IV期的阳性表达率分别为66.7%(12/18)和96.7%(29/30),随病理分期进展阳性表达率升高,差异具有统计学意义(p0.05);淋巴结无转移和有转移的阳性表达率分别为68.4%(13/19)和96.6%(28/29),有淋巴结转移的阳性表达率升高,差异具有统计学意义(p0.05)。与年龄、分化程度及组织学类型均无关(p0.05)。恶性组组织中Cyclin D1蛋白在FIGO I-II期和III-IV期的阳性表达率分别为61.1%(11/18)和93.3%(28/30),随病理分期进展阳性表达率升高,差异具有统计学意义(p0.05);淋巴结无转移和有转移的阳性表达率分别为63.2%(12/19)和93.1%(27/29),有淋巴结转移的阳性表达率升高,差异具有统计学意义(p0.05)。与年龄、分化程度及组织学类型均无关(p0.05)。结论1.上皮性卵巢癌血浆中let-7a的表达水平下调,ROC曲线分析显示血浆let-7a的检测对上皮性卵巢癌的诊断有一定准确性,可能作为潜在的诊断标志物。2.Let-7a在上皮性卵巢癌组织中表达水平下调,其靶基因HMGA2和Cyclin D1表达水平上调,共同参与了上皮性卵巢癌的发生发展。
[Abstract]:......
【学位授予单位】：郑州大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2017
【分类号】：R737.31

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本文编号：1565231