假基因BMI1P1在AML中表达研究以及假基因POU5F1B调节HCC细胞功能研究

发布时间：2018-03-08 14:26

本文选题：基因　切入点：BMI1P1　出处：《江苏大学》2017年硕士论文　论文类型：学位论文

【摘要】：目的:一,假基因临床研究B细胞特异性莫尼氏鼠白血病病毒插入点1基因1(BMI1P1)是干细胞基因BMI1的假基因之一,研究假基因BMI1P1在急性髓细胞白血病(acute myeloid leukemia,AML)患者中的表达态势并探讨其相关性以及临床意义。二,假基因功能研究POU结构域5类转录因子1B基因(POU5F1B)是干细胞基因OCT4的假基因之一,探索POU5F1B在肝细胞癌(HCC)中的致病机制。方法:1.应用RQ-PCR方法检测36例对照和144例初诊AML患者中BMI1P1假基因的转录本含量,并分析其临床相关性。2.构建POU5F1B过表达的Hep3B稳定细胞株以及POU5F1B敲除的Hep3B细胞株,应用RQ-PCR技术检测转染HCC细胞中的POU5F1B表达情况。3.进行细胞生长实验、生存实验、平板克隆形成实验、凋亡实验、划痕实验、肿瘤球形成实验以及耐药实验,观察POU5F1B转染细胞的增殖、生存、迁移、抗凋亡、自我更新能力以及耐药性能力。4.运用Target Scan、Miranda、DIANA以及mi RDB靶向预测程序预测可以靶向POU5F1B的mi RNA,并运用RQ-PCR技术检测POU5F1B转染细胞中mi RNA的表达差异,以及运用RQ-PCR检测OCT4、NANOG以及MYC的表达水平,另采用Western blot技术检测POU5F1B转染细胞中OCT4以及MYC的表达状况。结果:1.与对照组相比,AML患者存在BMI1P1的低表达,差异有显著统计学意义(P0.001)。通过接收者操作特征曲线(ROC)分析表明BMI1P1表达水平能有效鉴别AML患病组和健康对照组(AUC=0.895)。BMI1P1高表达组的原始细胞计数明显低于低表达组(P=0.008),高表达组化疗后完全缓解率较低表达组显著增高(P=0.023)。此外,Kaplan Meier生存分析表明,在所有AML病例以及非M3型AML病例中,与BMI1P1高表达组相比,低表达组有着较低的无病生存时间(LFS,P=0.002和P=0.01)和总体生存时间(OS,P0.001和P=0.011)。多因素分析也指示了BMI1P1的过表达可以作为所有AML病例以及非M3病例的独立的预后影响因素(P=0.019和P=0.027)。26例初诊AML患者在获得完全缓解后BMI1P1表达水平均有所升高(P0.001)。2.POU5F1B在HCC细胞中的功能研究:(1)POU5F1B-Hep3B细胞和MockHep3B两组细胞中,POU5F1B转染细胞的POU5F1B表达量明显高于对照组(P0.01)。(2)POU5F1B-Hep3B细胞生长速度均明显快于Mock-Hep3B细胞(P0.01);POU5F1B-Hep3B细胞在营养不良的体外环境下的体外扩增能力明显高于对照组(P0.01);平板克隆形成实验也证实了POU5F1B-Hep3B组细胞增殖能力明显比对照强(P0.01);(3)POU5F1B-Hep3B细胞的迁移能力明显高于对照组细胞(P0.01),在36h时POU5F1B-Hep3B细胞已能愈合,而对照组则没有。(4)Mock-Hep3B细胞比POU5F1B-Hep3B细胞更易发生凋亡(P0.01)。(5)POU5F1B-Hep3B组的细胞在干细胞培养液中能够聚集形成较大肿瘤球,而对照组的细胞大多散在;干细胞肿瘤球形成率在POU5F1B组明显升高(P0.01)。(6)POU5F1B-Hep3B细胞对于化疗药阿霉素以及5-氟尿嘧啶的抵抗显著高于对照组(P0.05);但是却不能增加对顺铂的抵抗性。(7)在POU5F1B转染细胞中OCT4以及MYC的表达含量均显著高于对照组(P0.01)。(8)Target Scan,Miranda,DIANA以及mi RDB预测程序预测可以靶向POU5F1B的共同mi RNA为hsa-mi R299-3p,POU5F1B的过表达可能竞争性捕获hsa-mi R299-3p,使OCT4逃逸与mi R-299-3p等抑癌mi RNA的结合,从而使OCT4表达的增加。结论:1.假基因BMI1P1在AML中下调。假基因BMI1P1可作为生物标志物用于检测AML。BMI1P1可作为AML的重要预后标志物以及疗效评价的重要标志物。2.构建POU5F1B-Hep3B、Mock-Hep3B、si-POU5F1B-Hep3B以及si-Mock-Hep3B细胞株;3.POU5F1B能够在体外促进Hep3B细胞的增殖、迁移、集落形成并具有抗凋亡作用,且能够促进肿瘤球的形成并参与耐药;4.POU5F1B可能充当竞争性诱饵通过捕获mi R-299-3p等抑癌的mi RNA,使OCT4逃逸这些抑癌mi RNA的绑定,而表达增加,从而促进肿瘤的发生发展。
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【学位授予单位】：江苏大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2017
【分类号】：R733.7

【参考文献】