地塞米松对肝癌微循环功能的影响及机制的研究

发布时间：2018-03-09 00:02

  本文选题：微循环　切入点：肝癌　出处：《北京协和医学院》2016年博士论文　论文类型：学位论文

【摘要】：第一部分地塞米松对肝癌微循环功能的影响目的：研究糖皮质激素地塞米松(Dexamethasone, Dex)对肝细胞肝癌(Hepatocellular carcinoma)肿瘤的生长和活体微循环功能的影响。方法：构建转基因裸鼠原位肝癌模型,通过活体显微观测系统检测地塞米松(Dex)对肝癌小鼠肿瘤生长的影响,观察肝癌表面微血管生成的变化。采用肝癌H22诱导金黄地鼠颊囊产生肿瘤,构建肝癌肿瘤模型,观察Dex对肿瘤微循环功能的影响,检测包括肿瘤的生长大小、微血管迂曲度、微血管面积密度及血流量,统计数据,并进行定量分析。结果：(1)裸鼠原位肝癌：为了研究Dex对小鼠肝癌微循环功能的影响,接种绿色荧光蛋白GFP标记的HepG2-GFP肝癌细胞至BALB/c-nu裸鼠肝脏表面,构建转基因裸鼠原位肝癌模型。实验分组为Dex药物组,注射剂量2.5 μg/g,对照组为生理盐水,每组10只小鼠,治疗16天。结果显示,两组小鼠体重较实验前分别增加了21%,1%；每2天统计肿瘤增殖情况,制作生长曲线图,结果显示Dex组比对照组的肿瘤生长面积较小(P0.05),荧光图像结果显示Dex组肿瘤血管平均总长度较对照组小,约为对照组的22%(1159±1227 pixel vs 5177±2840 pixel, P 0.01)。实验结束后处死小鼠,肿瘤称重,Dex组肿瘤的重量较对照组小(0.0161±0.0083 g vs 0.0297±0.0085 g, P 0.05),抑瘤率达到了45.8%,表明Dex对小鼠原位肝癌肿瘤的生长和血管生成均起到了抑制作用。(2)金黄地鼠颊囊肝癌实验：接种肝癌H22细胞至3-4周龄的金黄地鼠颊囊处,接种第三天给予药物治疗,实验分组：对照组生理盐水；Dex组25μg/g; Dex+拮抗剂组；单独拮抗剂组。分别观察在3,5,7天的肿瘤生长大小和微循环功能变化。结果显示,Dex单独治疗组肿瘤的大小在第5和7天均较对照组明显降低(P0.05),Dex+拮抗剂组、单独拮抗剂组与对照组比较无显著差异。多普勒激光扫描系统分析肿瘤表面血流量的变化,结果显示Dex组与对照组比较,在第5天和第7天血流量较低(P0.05)；图像分析结果显示,Dex组的微血管迂曲度在第5天和第7天,比对照组较小(P0.05),而其余两组与对照组相比无显著差异。实验第5天,结果显示Dex组的微血管面积密度为(13.38±1.898% vs 20.39±2.573%,P0.05)比对照组较小,其余两组微血管面积密度与对照组相比无显著差异。结论：地塞米松对肝癌HepG2-GFP诱导的转基因裸鼠原位肝癌具有抑制肿瘤生长的作用,并抑制肝癌肿瘤的血管生成。地塞米松对H22诱导的金黄地鼠颊囊肝癌肿瘤生长起到抑制作用,在接种后的第5天,第7天表现出微血管的迂曲度的改善、微血管面积密度的降低和肿瘤表面血流量的降低。第二部分地塞米松对肝癌糖异生和血管生成的影响及机制研究目的：研究Dex对肝癌肿瘤生长、糖异生和血管生成的影响,探讨其潜在的分子作用调控机制。方法：分别培养肝癌H22细胞与小鼠正常的肝细胞NCTC-1469, Western blot检测两种细胞内促进糖异生的关键酶肝癌PEPCK和G6Pase的表达水平。H22细胞经不同浓度的Dex (0,0.1,1,10μM)处理一周后,采用Western blot检测PEPCK和G6Pase两种酶的蛋白表达水平。收集H22被Dex处理一周后的培养上清液,干预HUVECs的生长。采用迁移实验、成管实验、Transwell通透性实验,分别检测这些培养上清液对HUVECs迁移能力、成管能力、单层细胞通透性能力的影响。接种H22至BALB/c小鼠皮下,构建小鼠肝癌移植瘤模型。四天后,分别给予不同剂量的Dex药物0 μg/g,2.5 μg/g,5 μg/g治疗小鼠16天(n=7),统计肿瘤生长曲线,实验结束后处死小鼠,采用免疫组化实验检测Dex对小鼠肝癌肿瘤糖异生功能和血管生成的影响,检测组织内促进糖异生的关键性酶PEPCK、 G6Pase、11β-HSD1和11β-HSD2的表达水平,并检测肿瘤组织内CD31的表达水平。结果：实验结果表明,与小鼠正常肝细胞NCTC-1469相比,PEPCK和G6Pase这两种调控糖异生的酶在小鼠肝癌H22细胞中表达几乎是缺失的(P0.01)。Dex处理H22一周后,细胞内PEPCK和G6Pase这两种酶的表达量显著上调(P0.01),结果表明Dex能促进肝癌H22细胞内的糖异生过程。培养人的脐静脉内皮细胞至汇合状态,将Dex处理后的H22上清液与内皮细胞进行共培养,结果显示培养上清液中的Dex对HUVECs的促迁移、促成管能力均显示降低(P0.05,P0.05),并对内皮细胞的单层通透性产生影响(P0.05)。体内实验结果显示,Dex治疗组的小鼠肿瘤组织内,PEPCK和G6Pase表达量高于0 μg/g对照组(P0.01);调控糖异生过程的另外两种关键性酶11β-HSDs的异常表达情况也得以恢复,表明Dex促进小鼠肝癌肿瘤内糖异生功能。CD31的免疫组化实验结果显示,Dex治疗组的肿瘤内微血管密度低于对照组(P0.05),表明Dex抑制小鼠肝癌肿瘤内的血管生成。结论：Dex抑制小鼠肝癌肿瘤的生长和血管生成,其调控机制可能是通过促进肿瘤细胞内的糖异生途径对肝癌小鼠的血管生成产生影响。
[Abstract]:......
【学位授予单位】：北京协和医学院
【学位级别】：博士
【学位授予年份】：2016
【分类号】：R735.7

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本文编号：1586101