MACC1与卵巢癌患者预后及其顺铂耐药性关系的分子机制研究

发布时间：2018-03-15 00:34

本文选题：上皮性卵巢癌　切入点：MACC1　出处：《郑州大学》2016年博士论文　论文类型：学位论文

【摘要】：卵巢癌是妇科领域比较常见的恶性肿瘤,也是死亡率较高的妇科肿瘤之一。有资料表明,中国卵巢癌的发病率为十万分之五,且呈上升趋势。随着新的高效低毒化疗药物的临床应用,卵巢癌预后有所改善,但其5年生存率仍徘徊在50%左右。且其复发率较高,约为80%,在治疗起始后的3年内极容易复发,预后较差。结肠癌转移相关基因1(metastasis-associated in colon cancer-1,MACC1)是一种和肿瘤转移密切相关的基因,能促进结肠癌细胞发生增殖侵袭,并促使肝细胞生长因子(hepatocyte growth factor,HGF)诱导下结肠癌细胞的扩散转移的发生,是HGF/C-met(c-metprotoncogene)信号通路中met基因的关键调节因子。多项研究证实,在胃癌、肝癌和胰腺癌等多种恶性肿瘤组织中均可检测到高表达的HGF和C-met,其过表达与恶性肿瘤的复发和预后不良存在相关性。目前卵巢癌的主要治疗方式为手术治疗和化疗联合进行。近年来,随着临床和科研的不断深入,卵巢癌治疗方案有所调整,但临床治疗效果及患者预后并未明显提升。铂类化合物被证明是治疗卵巢癌最有效的化疗药物,但其化疗耐药的存在使得其5年生存率仅为50%左右。目前的有关研究比较多地集中在阐述卵巢癌患者的致病机理,但是迄今为止上皮性卵巢癌发生发展中的分子生物学相关机制并未得到明确阐述。化疗耐药的产生是制约卵巢癌患者预后改善的重要因素,因此研究化疗耐药机制、寻找有效的分子治疗靶点及低毒高效耐药逆转剂,具有比较广阔的临床应用前景。目的对我院收治的卵巢癌患者的基本临床及病理资料进行分析,结合患者的生存时间,探索影响卵巢癌患者预后的因素。基于课题组前期对MACC1与卵巢癌的相关关系的初步分析,更深层次地研究MACC1、HGF、C-met和HE4蛋白在卵巢癌中的表达,探讨其在卵巢癌发展中的作用和相关性,并为判断预后提供观察线索。通过研究MACC1干扰对上皮性卵巢癌细胞以及癌耐药细胞对顺铂敏感性的变化,进一步探索MACC1在卵巢癌化疗耐药中的作用,同时通过MACC1基因在细胞内的耐药性研究为临床上逆转卵巢癌化疗耐药、提高化疗敏感性提供新的理论,并通过体内实验进一步探讨MACC1在卵巢癌移植瘤增殖中的作用。方法1.采用统计学的Pearson卡方检验、Kaplan-Meier生存曲线、log-rank检验和Cox回归等方法来分析上皮性卵巢癌患者的临床病理特征与术后预后特点,明确预后危险因素及影响预后的独立因素;2.采用组织芯片技术、免疫组织化学染色等方法获取MACC1、C-met、HGF和HE4在癌组织和癌旁组织中的表达率;3.采用统计学的Pearson卡方检验、Kaplan-Meier生存曲线、log-rank检验和Cox回归等方法分析不同表达率下的上皮性卵巢癌患者的临床病理特征及预后情况;4.利用细胞培养技术培养顺铂耐药和敏感细胞株,采用实时荧光定量PCR以及Western blot的方法,检测不同分组中MACC1在m RNA和蛋白水平表达情况,并采用MTT法来评价不同组对顺铂化疗敏感性的变化情况;5.采用流式细胞学检测不同组别顺铂加药前后细胞凋亡情况,采用实时荧光定量PCR以及Western blot的方法来检测ERK1/2及p-ERK1/2、cleaved caspase-3和caspase-3蛋白的变化情况,同时分析加入U0126后对上述蛋白表达的影响;6.收集细胞培养中经过不同处理的细胞,采用RT-PCR的方法以及Western blot来检测不同处理组中裸鼠的MACC1 m RNA和蛋白表达,并记录不同处理组裸鼠移植瘤的重量及肿瘤的生长速度。结果1.淋巴结转移、临床分期、病理分化、残余肿瘤直径和化疗情况是影响上皮性卵巢癌患者预后的独立因素,对上皮性卵巢癌患者预后的危险大小依次为:淋巴结转移病理分化化疗情况临床分期残余肿瘤直径;2.MACC1、C-met、HGF和HE4在卵巢癌组织中的表达率明显高于其在癌旁组织中的表达,其在肿瘤大小、淋巴结转移、临床分期、组织病理分化、残余肿瘤直径和化疗情况中存在差异;3.MACC1、C-met、HGF和HE4高表达患者的中位生存期低于低表达者,其表达水平两两之间存在相关性,存在协同作用;4.MACC1基因沉默组的MACC1 m RNA和蛋白水平低于空白组和空质粒组,MACC1沉默组的顺铂半数抑制浓度(IC50)低于空白组和空质粒组,转染p-super-EGFP-MACC1 sh RNA组MACC1基因表达下调,其m RNA和蛋白水平较未转染组和空质粒组明显下降;5.同浓度顺铂对MACC1沉默的SKOV3/DDP的抑制率显著高于其对转染空质粒和未转染组的抑制率,MACC1沉默组细胞增殖速度低于空质粒组与未转染组,MACC1基因沉默的细胞与未转染组和空质粒组相比,caspase-3、p-ERK1/2蛋白含量明显的降低,而cleaved caspase-3则明显升高;6.pc DNA-MACC1组中的裸鼠肿瘤组织中MACC1的m RNA表达、蛋白表达、裸鼠移植瘤的重量及肿瘤的生长速度均高于未处理组和空载体转染组,未处理组和空载体转染组之间无差异。结论1.MACC1基因表达异常与上皮性卵巢癌的发生发展存在密切联系,MACC1、C-met、HGF和HE4之间的协同作用与上皮性卵巢癌细胞的恶性转化相关;2.MACC1基因在SKOV3/DDP细胞中的表达呈现明显升高趋势,沉默MACC1能有效逆转SKOV3/DDP细胞对顺铂的耐药性;3.MACC1有可能参与到卵巢癌对顺铂的敏感性调节,其可能通过ERK通路调节增殖、凋亡及顺铂敏感性;4.MACC1在上皮性卵巢癌发生发展中会产生多样的生物学行为改变,可能成为治疗上皮性卵巢癌的新型分子靶点。
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【学位授予单位】：郑州大学
【学位级别】：博士
【学位授予年份】：2016
【分类号】：R737.31

【参考文献】