APOBEC3基因多态性与慢性HBV易感及HCC发生的相关性研究

发布时间：2018-03-19 08:34

本文选题：APOBEC3　切入点：单核苷酸多态性　出处：《吉林大学》2017年博士论文　论文类型：学位论文

【摘要】：HBV感染是一种全世界范围流行的感染性疾病,尽管过去几十年中乙型肝炎病毒感染的发病机理和治疗措施上已经有了相当大的改善,全球仍约有2亿4千万人感染HBV,每年约有62万人死于终末期肝硬化和原发性肝细胞癌。我国人群中的乙肝表面抗原的携带率高达7.18%,也就是说,约有9千万人为乙肝病毒携带者,每年死于HBV感染后肝病的患者达20万人。HBV感染后患者预后有很大差异,而基因和环境囚素均参与到疾病的易感和肝病进展当中。APOBEC3是胞嘧啶脱氨酶家族成员,是人体重要的先天免疫分子,在机体对抗逆转录病毒过程中起到重要作用,因HBVDNA复制也存在逆转录过程,故对乙型肝炎病毒也有显著的抑制作用,一方面通过编辑病毒DNA胞嘧啶变成尿嘧啶,部分被尿嘧啶转葡糖尿激酶识别降解DNA,另外通过对病毒复制阶段的抑制和促进降解发挥抑制HBVDNA的作用。另一方面轻度的编辑可能会导致病毒的逃逸和准种变异。研究证实APOBEC3家族成员均可显著抑制HBVDNA。近期研究显示,APOBEC3A、APOBEC3B是干扰素、淋巴毒素-β受体激动剂、INF--γ、TNF-α发挥降解cccDNA作用的必须靶点。故我们拟通过临床病例对照研究,明确APOBEC3基因多态性对HBV易感、感染后肝脏疾病进展及HCC的发生的影响,为了找到新的生物学标志物及有效抑制HBV,甚至清除cccDNA的分子。本研究分以下三部分。(1)APOBEC3G单核苷酸多态性与慢性HBV易感及HCC发生的相关性研究目的:本研究选取 APOBEC3G rs7291971、rs5757465、rs5757463、rs8177832、rs2011861五个单核苷酸多态性位点,分析SNPs各基因型、单倍体型与HBV易感及HCC发生的相关性。方法:应用基质辅助激光解析电离飞行时间质谱技术(MALDI-TOF-MS)在Sequenon平台进行SNP基因型检测。所有受试患者均为中国汉族,包括慢性HBV感染患者共657例和健康对照299例。慢性HBV感染患者来源于2012-2015年就诊于吉林大学第一医院的住院患者,可分为非肝癌组(N=370)和原发性肝癌组(N=287),非肝癌组包括慢性乙型肝炎患者104例和乙型肝炎后肝硬化患者266例。分析这5个SNP基因型及单倍体型在各组分布频率,并通过SNP各基因型血清病毒载量及e抗原血清学转换率的差异分析SNP影响HBV易感性及HCC发生的原因。结果:APOBEC3Grs7291971、rs5757463、rs5757465与慢性HBV易感及HCC发生无显著相关性。而rs8177832的G等位基因与慢性HBV感染风险减少相关(OR = 0.69,95%CI:0.50-0.95);相对于AA基因型,rs8177832AG基因型、AG联合GG基因型与慢性HBV感染风险减少相关(OR = 0.67,95%CI:0.47-0.96;OR = 0.66,95%CI:0.47-0.94)。Rs8177832 G等位基因相对A等位基因有低HCC发生风险(OR = 0.58,95%CI:0.39-0.87);相对AA基因型,AG基因型和AG联合GG基因型与HCC发生风险减低有关(OR = 0.53,95%CI:0.33-0.84;OR = 0.54,95%CI:0.35-0.85)。同时,相对于CC基因型,rs2011861 CT、TT基因型以及CT联合TT基因型相对于野生型CC,均与HCC发生风险增高有关(OR= 1.69,95%CI:1.02-2.80;OR= 1.82,95%CI:1.08-3.06;OR = 1.75,95%CI:1.08-2.82)。单倍体型分析显示:rs5757463-rs8177832 C-G相对于野生型C-A单倍体型与慢性HBV发生风险下降有关(OR = 0.71;95%CI:0.51-0.98)。Rs7291971-rs8177832G-G 单倍体型相对野生型 C-A(OR = 0.61,95%CI:0.39-0.95)、rs5757463-rs8177832C-G单倍体型相对野生型C-A(OR = 0.61,95%CI:0.40-0.91)、rs5757465-rs8177832 T-G单倍体型相对于野生型T-A(OR = 0.58,95%CI:0.38-0.88)与HCC发生风险下降相关。相反,rs5757463-rs2011861 C-T、G-C两种单倍体型相对于野生型C-C(OR=1.41,95%CI:1.08-1.83;OR= 1.80,95%CI:1.15-2.82)、rs7291971-rs5757463-rs8177832 C-G-A单倍体型相对于野生型C-C-A(OR = 1.64;95%CI:1.03-2.61)、rs7291971-rs5757463-rs2011861 C-G-C单倍体型相对于野生型C-C-C(OR = 1.70,95%CI:1.05-2.76)均有高的HCC发生风险。我们进一步分析了rs8177832、rs2011861基因型与乙肝病毒载量、e抗原血清学转换的相关性。结果显示:在Non-HCC组,rs8177832GG基因型的病毒载量低于AA基因型(P = 0.043,OR = 1.69,95%Cl:1.27-1.27)。在其他两组(HCC组、慢性HBV感染组),rs8177832野生型和突变型的HBV病毒载量并没有显著差异。在这三组中,rs2011861野生型和突变型的病毒载量没有显著差别。在Non-HCC组rs8177832 AG基因型和AG联合GG基因型显示出较高的HBeAg转换率(P = 0.02;P = 0.02);在慢性HBV感染组,AG基因型和AG联合GG基因型相对于野生型AA倾向于有高的HBeAg血清学转换率(P = 0.07;P = 0.07);在HCC组,HBeAg(+)HBeAb(-)与HBeAg(-)HBeAb(+)患者的比例没有差别。而在这三组中,rs2011861的各个突变基因型的HBeAg(+)HBeAb(-)与HBeAg(-)HBeAb(+)患者的比例无显著差别。(2)APOBEC3A、APOBEC3B、APOBEC3H单核苷酸多态性与慢性乙型肝炎疾病进展及HCC发生的相关性研究目的:本研究选取 APOBEC3A rs7286317、rs7290153;APOBEC3B rs2267398、rs2267401、rs2076109;APOBEC3H rs56695217、rs139292、rs139297、rs139302、rs139316共10个单核苷酸多态性位点,分析各SNPs基因型、单倍体型与慢性肝病进展及HCC发生的相关性。方法:应用基质辅助激光解析电离飞行时间质谱技术(MALDI-TOF-MS)在Sequenon平台进行SNP基因型检测,分析本研究收集的慢性HBV感染患者653例各SNP基因型分布。其中包括慢性乙型肝炎104例、乙型肝炎后肝硬化265例和HBV相关性肝癌患者285例。结果:APOBEC3A2 个 SNP 位点:rs7286317、rs7290153;APOBEC3B 的 3 个 SNP位点:rs2267398、rs2267401、rs2076109;APOBEC3H 5 个 SNP 位点:rs56695217、rs139292、rs139297、rs139302、rs139316在各组的基因型和等位基因分布无差异。单倍体型分析显示:APOBEC3A、APOBEC3H各组之间单倍体型分布无差异。而APOBEC3B rs2267398-rs2267401-rs2076109各单倍体型在肝硬化和原发性肝细胞癌组分布有差异,突变型C-T-A、C-T-G、T-G-G-T-T-G相对于野生型C-G-G发生HCC的风险均显著下降(OR=0.19,95%C1:0.07-0.53;OR=0.16,95%C1:0.06-0.45;OR=0.18,95%C1:0.07-0.49;OR=0.07,95%C1:0.01-0.38)。(3)APOBEC3B缺失与慢性HBV易感及HCC预后的相关性分析目的:本研究通过测定APOBEC3B缺失基因型分布,分析APOBEC3B缺失与乙肝易感、HCC发生及预后相关性。方法:应用PCR方法测定APOBEC3B缺失,分析于吉林大学第一医院收集的慢性HBV感染患者654例和健康对照249例。慢性HBV感染患者包括Non-HCC组患者367例(慢性乙型肝炎患者104例、肝硬化患者263例)和原发性肝细胞癌患者287例。对HCC患者进行预后随访,共随访到243例,对患者的详细临床资料及生存期进行统计。结果:慢性HBV感染组、Non-HCC组、HCC组分别与健康对照组进行比较,慢性HBV感染组、Non-HCC组与健康对照组进行比较在基因型分布和等位基因分布上无显著差异。HCC组与健康对照组比较,HCC组患者的Deletion/Deletion(DD)相对于野生型Intact/Intact(Ⅱ)基因型比例明显高于健康对照,提不APOBEC3B缺失增加HCC发生风险(P = 0.041,OR= 1.95,95%Cl:1.03-3.69)。生存分析显示三种基因型患者的总体生存率无统计学差异。综上,我们得出如下结论:(1)APOBEC3G rs8177832 AG基因型和G单倍体型可减少慢性HBV易感及HCC的发生风险,可能是通过增强APOBEC3G对HBV的抑制作用和促进e抗原的血清学转化而发挥作用。Rs2011861 CT、TT基因型与高的HCC发生风险相关。(2)APOBEC3A rs7286317、rs7290153,APOBEC3B rs2267398、rs2267401、rs2076109,APOBEC3H rs56695217、rs139292、rs139297、rs139302、rs139316 与慢性肝病进展及HCC发生无显著相关性。(3)APOBEC3B缺失与HCC的发生风险增高相关,与慢性HBV易感及慢性乙型肝炎疾病进展无显著相关性。APOBEC3B缺失对HCC患者总体生存率无影响。
[Abstract]:......
【学位授予单位】：吉林大学
【学位级别】：博士
【学位授予年份】：2017
【分类号】：R512.62;R735.7

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