长非编码RNA LncTSG1抑制肝癌转移的功能及机制研究

发布时间：2018-03-22 22:03

  本文选题：LncRNA　切入点：肝细胞癌　出处：《中国人民解放军医学院》2016年博士论文　论文类型：学位论文

【摘要】：目的：肝癌是我国最常见的恶性肿瘤之一,其发生和发展是一个多因素参与的复杂调控过程；长链非编码RNAs (Long non-coding RNA, LncRNAs)是指不具备蛋白编码能力的,长度大于200个核苷酸的RNA转录本。LncRNA参与调节细胞增殖、凋亡、迁移、基因组稳定性等多种生理过程,其异常表达与多种疾病密切相关,包括肿瘤。因此,寻找到肝癌中异常表达的LncRNA,揭示其在肝癌中的生物学功能及调节的信号通路,对阐明肝癌的发生发展机制、发现潜在的诊断和治疗靶点具有重要意义。方法：采用晶芯(?)lncRNA芯片检测16对肝癌及癌旁组织中LncRNA的表达,筛选表达差异的LncRNA 。通过实时定量PCR技术检测LncTSG1在肝癌组织与癌旁组织中的表达水平,进一步验证芯片结果。通过RACE技术鉴定LncTSG1的5’和3’序列,进行数据库比对并扩增LncTSG1全长。通过在肝癌细胞中上调/下调LncTSG1的表达水平,检测对肝癌细胞增殖、迁移及侵袭的影响。通过生物信息学分析技术及RNA Pull Down联合质谱分析、RIP等实验方法寻找LncTSG1相互作用蛋白及调节的信号网络。结果：采用晶芯(?)lncRNA芯片对16对肝癌及对应癌旁组织中的LncRNA表达进行检测,分析发现和癌旁组织相比,LncTSG1在肝癌组织中表达显著下降。通过实时定量PCR技术对43对肝癌组织及相应癌旁组织中LncTSG1的表达水平进行检测,发现相对于癌旁组织LncTSG1在肝癌组织中的表达水平显著下调,与芯片结果一致。通过RACE技术鉴定出LncTSG1的5’端和3’端序列,并成功扩增出LncTSG1的全长,与数据库中的序列比对,结果显示5’端序列与数据库中注释的序列一致,3’端序列较数据库中注释的序列少约100bp。对表达谱芯片结果进行生物信息学分析,发现LncTSG1与参与EMT及细胞迁移相关的信号通路关系密切。通过在肝癌细胞中上调/下调LncTSG1的表达,进行相应的细胞功能学实验,结果显示,通过转染LncTSG1的重组质粒上调LncTSGl表达后,肝癌细胞的迁移和侵袭能力降低;通过siRNA干扰下调LncTSG1的表达后,肝癌细胞的迁移和侵袭能力增强,而增殖能力无明显变化。同时,下调LncTSG1可促进肝癌细胞发生EMT转变。荧光原位杂交及细胞组分分离技术证实LncTSG1主要定位于细胞浆。采用生物信息学方法分析并通过RIP实验发现LncTSG1可与AG02结合,提示LncTSG1在胞浆中可作为ceRNA发挥作用。通过预测软件分析可能与LncTSG1结合的micoRNA,并通过文献检索,发现has-miR-372和has-miR-10b与肿瘤的转移相关,是LncTSG1潜在调控靶点。通过实时定量PCR检测二者下游靶基因的表达水平,发现抑制LncTSG1的表达能够显著下调肿瘤转移相关基因ARHGAP6、CELF2、MAPK10、TNS1、SYNPO2的表达,表明LncTSG1可能通过干扰has-miR-372和has-miR-10b对下游mRNA的调控来发挥ceRNA的功能。同时,通过RNA Pull Down联合质谱分析发现LncTSG1可与肿瘤转移相关蛋白hnRNP H结合。结论：与正常肝组织相比LncTSG1在肝癌组织标本中表达量显著下调。LncTSG1能够显著抑制肝癌细胞的迁移、侵袭能力及EMT转变,表明LncTSG1是肝癌中重要的抑癌基因,是潜在的治疗靶点。
[Abstract]:......
【学位授予单位】：中国人民解放军医学院
【学位级别】：博士
【学位授予年份】：2016
【分类号】：R735.7

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本文编号：1650579