HMGB-1协同TCA促进胆管癌增殖过程的作用和机制研究

发布时间：2018-03-23 10:50

  本文选题：胆管癌　切入点：HMGB-1　出处：《南京医科大学》2016年硕士论文

【摘要】：背景胆管癌是一种呈高度侵袭性的恶性肿瘤,根据其发生部位可分为肝内胆管癌、肝门部胆管癌和肝外胆管癌。虽然胆管癌发生率较低,但因其恶性程度较高给胆管癌的治疗造成一定的困难。胆管癌的危险因素主要有肥胖、胆汁淤积及DNA甲基化等。慢性炎症在胆管癌的发展过程中起着重要的调节作用,比如慢性肝炎、原发性硬化性胆管炎,肝硬化等,已经成为胆管癌重要的癌前病变和高危因素。高迁徙率族蛋白(High mobility group box 1, HMGB-1)在真核生物的细胞核中广泛的表达,但受到一定的刺激时,HMGB-1可释放到细胞外,作为损伤模式相关分子,参与炎症因子的释放及其他免疫反应。HMGB-1在炎性反应及癌症的发展过程中起着重要的作用。有研究发现,HMGB-1可通过NF-κB (nuclear factor kappa B)促进肝细胞癌的增殖、侵袭和转移。在肝癌的动物模型及人乳腺癌的研究过程中也发现,HMGB-1可明显促进肿瘤的发展过程。HMGB-1被释放到细胞外可激活NF-κB及PI-3K (phosphatidylinositol-3-kinase)从而激活免疫细胞,促进炎症反应,刺激肿瘤细胞的增殖侵袭和转移并抑制其凋亡。最近的研究表明,HMGB-1可促进胆管癌细胞的侵袭,但是否可促进胆管癌的增殖作用,目前尚未见文献报道。目的1.收集2010年1月-2015年1月间在南京医科大学第二附属医院收治的胆管癌患者的病历资料及病理标本,免疫组化检测HMGB-1在胆管癌患者及其癌旁组织中的表达。分析HMGB-1的表达与胆管癌患者临床分期,分化程度,肿瘤大小及是否发生转移之间的关系；分析HMGB-1的表达量与患者生存时间之间的关系。2.收集胆管癌及胆结石患者的胆汁,色谱法分析胆汁中结合胆汁酸和游离胆汁酸的含量。3.观察HMGB-1与胆汁酸(TCA,DCA)对胆管癌细胞增殖及炎症发生过程中的相互作用。方法1.收集2010-2015年间胆管癌患者的临床资料及病理组织,做免疫组化分析,根据Bannar法对HMGB-1的表达进行评分；Western blotting方法检测胆管癌及其癌旁组织组织中HMGB-1的表达。2.采用Kapan-Meier生存分析法HMGB-1的表达量与患者生存时间的关系,运用Cox比例风险模型,单因素及多因素进一步分析胆管癌患者的生存时间与TNM分期、肿瘤大小、分化程度、血管转移、神经转移等之间的关系。3.收集胆管癌及胆管结石患者ERCP术后胆汁酸各20例高效液相色谱法分析胆汁中结合胆汁酸(TCA)、游离胆汁酸(DCA)的含量。4. qRT-PCR及western blotting测HMGB-1在胆管癌细胞株及胆管上皮细胞HBEPic中的表达;ELISA检测HMGB-1在胆管癌患者及胆结石患者胆汁中的释放量。5.不同浓度的TCA (900pM), DCA(400μM)分别刺激胆管癌细胞(HuCCT-1,RBE)48小时,qRT-PCR, western blotting和ELISA观察HMGB-1在mRNA和蛋白水平的变化。6.不同浓度的TCA (900μM),DCA (400μM)和HMGB-1(10ng/ml)单独或联合作用刺激胆管癌细胞株(HuCCT-1, RBE)24,48和72小时,实验分为以下几组：空白组、NC组、TCA组、DCA组、HMGB-1组、"HMGB-1+TCA"组、"HMGB-1+DCA"组,CCK8检测细胞的增殖作用。7.不同浓度的TCA(900μM),DCA (400μM)和HMGB-1 (10ng/ml)单独或联合作用刺激胆管癌细胞株(HuCCT-1, RBE)48小时,实验分为以下几组：空白组、NC组、TCA组、DCA组、HMGB-1组、"HMGB-1+TCA"组、"HMGB-1+DCA"组。qRT-PCR检测RAGE, S1PR2, IL-6, IL-1α, TNFα的表达。8. Kaplan-Meier法计算HMGB-1与胆管癌患者总体生存时间及无复发生存时间之间的关系。结果1. HMGB-1在不同的胆管癌患者中的表达量亦不相同,RAGE在胆管癌组织中的表达明显高于其癌旁组织；HMGB-1的表达量与肿瘤的大小、分化程度、TNM分期均有明显的正相关。2. HMGB-1在体积较大的胆管癌患者组织中高表达；HMGB-1可促进胆管癌细胞的增殖,且在一定的时间内,随浓度的增加刺激作用也明显增强。3. HMGB-1在胆管癌患者胆汁中的含量明显高于胆结石患者；HMGB-1在胆管癌细胞中的表达明显高于正常胆管上皮细胞。4.TCA可明显促进HMGB-1的释放,而DCA的促进作用不明显。5.TCA可促进胆管癌细胞的增殖；DCA可抑制胆管癌细胞的增殖；]HMGB-1可协同TCA对胆管癌细胞的增殖作用,而减弱DCA对胆管癌细胞的抑制作用。6. HMGB-1可促进TCA受体(S1PR2)的表达,但抑制DCA受体(FXR)的表达;HMGB-1与TCA协同可促进EAGE, S1PR2及炎症因子(IL-6,IL-la,TNFα)的释放。7. HMGB-1的表达量与患者的总体生存时间及疾病无复发生存时间密切相关。结论HMGB-1在胆管癌患者中高表达,与患者肿瘤大小,分化程度,TNM分期等正相关；HMBGB-1表达越高,胆管癌患者的总体生存时间及无复发生存时间越短；HMGB-1可协同TCA促进胆管癌的增殖及炎症反应过程。
[Abstract]:......
【学位授予单位】：南京医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2016
【分类号】：R735.8

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本文编号：1653138