环孢素A通过抑制STAT3增加肺癌细胞对吉非替尼的敏感性

发布时间：2018-03-31 09:52

  本文选题：非小细胞肺癌　切入点：吉非替尼　出处：《浙江大学》2015年博士论文

【摘要】：吉非替尼是第一代以表皮生长因子受体(EGFR)为靶点的可逆性小分子酪氨酸激酶抑制剂(EGFR-TKI),对具有EGFR敏感突变的晚期非小细胞肺癌(NSCLC)患者有着极好的疗效,能够显著延长患者生存时间,改善生活质量。目前EGFR抑制剂已成为具有EGFR敏感突变的晚期NSCLC患者的一个标准治疗。然而,几乎所有初始治疗敏感的患者最终仍不可避免的出现了耐药,多项临床研究显示其治疗的中位疾病进展时间(PFS)约为10个月。环孢素A(CsA)作为一个多药耐药(MDR)相关蛋白抑制剂,能够逆转多种化疗药物的耐药。最新研究发现CsA还可以通过抑制活化T细胞核因子(NFAT)克服小分子靶向药物的耐药,如伊马替尼,达沙替尼,selumetinib等。CsA能否增敏EGFR-TKI,并进一步克服耐药尚未有报道。如何利用目前可以获得的方法来逆转EGFR-TKIs的耐药值得进一步的探索。目的：通过体内外实验,探讨环孢素A联合吉非替尼对EGFR-TKI敏感及耐药肺癌细胞增殖和凋亡的影响。并深入分析CsA增敏并逆转吉非替尼耐药的机制。方法：选取初始吉非替尼敏感及耐药肺癌细胞株,并通过持续吉非替尼处理建立获得性耐药细胞株；采用MTS方法分析CsA是否可以增加各类肺癌细胞株细胞对于吉非替尼的敏感性；运用流式细胞仪定量分析药物处理后细胞凋亡及细胞周期的改变；建立非小细胞肺癌裸鼠移植瘤模型评估CsA对吉非替尼在体内的增敏作用；通过Western blot和免疫荧光分析CsA联合吉非替尼处理后的NSCLC细胞中STAT3, Akt, Erk以及NFAT1等与药物敏感性相关分子的激活情况；并通过siRNA的方法确认下调STAT3或NFAT1后各组肺癌细胞对吉非替尼敏感性的变化。进一步收集经EGFR-TKI治疗的肺癌患者肿瘤样本,分析肿瘤细胞中STAT3及其磷酸化水平与EGFR-TKI治疗效果的关系。结果：在EGFR敏感突变、原发耐药及获得性耐药的肺癌细胞株中,CsA均能提高吉非替尼的增殖抑制作用。进一步研究提示CsA可以增加吉非替尼诱导的细胞凋亡,但未能影响吉非替尼对细胞周期的阻滞效果。吉非替尼可以诱导肺癌细胞株STAT3的激活,获得性耐药细胞株中P-STAT3的水平明显高于其亲本细胞株。CsA可以明显抑制STAT3的激活,减少Bcl-2的表达,从而增敏吉非替尼。为了证实STAT3是CsA增敏吉非替尼的关键分子,我们进一步用siRNA下调STAT3,结果发现STAT3的siRNA增敏效果与CsA类似,其可以促进吉非替尼的增殖抑制作用和增加细胞凋亡。而下调NFAT1未能实现增敏的效果。裸鼠移植瘤模型进一步证实CsA能够增加吉非替尼对肿瘤生长的抑制作用。从给药的第7天开始,CsA联合吉非替尼组平均肿瘤体积较吉非替尼单药组明显缩小(p0.05)。联合治疗组肿瘤组织中P-STAT3和Bcl-2的表达均明显低于吉非替尼单药组。我们进一步分析了22例经EGFR-TKI治疗的患者临床样本,结果发现EGFR-TKI治疗的效果与STAT3磷酸化水平密切相关,P-STAT3高组治疗的PFS显著低于p-STAT3低组(p0.05)。结论：CsA可以增加肺癌细胞对于吉非替尼治疗的敏感性,其增敏作用主要通过增加吉非替尼诱导的细胞凋亡来实现。机制研究发现吉非替尼诱导的反馈性STAT3激活与肺癌细胞的药物敏感性及耐药密切相关,CsA通过抑制吉非替尼诱导的STAT3激活,下调Bcl-2的表达,从而增敏各类肺癌细胞。吉非替尼联合CsA可以作为NSCLC治疗的一种新的策略。
[Abstract]:......
【学位授予单位】：浙江大学
【学位级别】：博士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：R734.2

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本文编号：1690210