microRNA-379-5p在膀胱癌中的表达、功能及其相关机制的研究

发布时间：2018-03-31 19:43

本文选题：膀胱癌　切入点：microRNA-379-5p　出处：《南京医科大学》2017年博士论文

【摘要】：背景在我国,目前膀胱癌的发病率位居泌尿系统癌症的首位。膀胱癌早期死亡率不高,但在出现浸润或转移的进展期膀胱癌患者中死亡率明显升高。尽管膀胱癌的综合治疗措施不断完善,当前的治疗仍不能获得满意效果。因此,从分子水平上研究相关基因在膀胱癌发生、发展和转移中的作用及分子机制,确立防治靶点,寻求新的干预策略对提高膀胱癌的疗效具有特殊的重要性和迫切性。微小RNA(microRNAs,miRNAs)是近年来发现的长度约21-25bp的非蛋白编码 RNA,通过与耙 mRNA 的 3'非编码区(3'-untranslated region,3'UTR)结合,在转录后水平促进靶mRNA降解和/或抑制其翻译而发挥类似于小干扰RNA的基因沉默作用。在人类体内,近1/3的基因表达均有miRNAs参与。后续的功能研究也已证明,miRNAs参与几乎所有的细胞生命活动,包括细胞的增殖、细胞周期、凋亡、迁移及侵袭等,并且研究发现miRNAs的异常表达存在于多种人类肿瘤中,包括肺癌、乳腺癌、胃癌及膀胱癌等。miRNAs在肿瘤的发生发展中可能扮演着癌基因或抑癌基因的角色。然而对于miRNAs在膀胱癌中的作用机制、靶基因及调控机制等,还有待于进一步阐明。研究目的探讨miRNA-379-5p(miR-379-5p)在膀胱癌中的表达、功能及其相关机制。方接首先我们检测了 miR-379-5p在膀胱癌组织标本和膀胱癌细胞系(T24,EJ和TCCSUP)中的表达情况。在T24和EJ细胞中转染miR-379-5p mimics和miR-NC后,通过RT-qPCR的方法检测miR-379-5p的表达;通过CCK8和Transwell实验检测miR-379-5p对膀胱癌细胞增殖、迁移和侵袭的影响。通过生物信息学相关软件预测发现MDM2是miR-379-5p的潜在靶基因,采用荧光素酶报告基因检测验证其是否靶向结合MDM2 3'-UTR;通过RT-qPCR和Western blot检测miR-379-5p对膀胱癌细胞中MDM2 mRNA和蛋白表达水平的影响。紧接着,在T24和EJ细胞中敲低MDM2表达后检测其对细胞的增殖、迁移和侵袭的影响。通过回复实验(rescueexperiments)来验证MDM2在miR-379-5p抑制膀胱癌细胞增殖、迁移和侵袭中的作用。最后,我们通过RT-qPCR和Western blot检测MDM2在膀胱癌组织中的表达情况,并且分析MDM2和miR-379-5p之间的表达相关性。结果1、本研究发现,与癌旁组织相比miR-379-5p在膀胱癌组织中表达下调。同时我们检测了三种膀胱癌细胞T24,EJ和TCCSUP中miR-379-5p的表达。结果显示,与正常人体膀胱上皮永生化细胞(SV-HUC-1)相比,miR-379-5p在三种膀胱癌细胞系中的表达均显著下调。2、在T24和EJ细胞中转染miR-379-5pmimics后,miR-379-5p的表达明显上升。CCK8和Transwell实验结果显示miR-379-5p高表达明显抑制T24和EJ细胞的增殖、迁移和侵袭。3、通过TargetScan和miRanda预测软件,我们发现MDM2是miR-379-5p的潜在靶基因。通过荧光素酶报告基因检测我们证实miR-379-5p可以靶向结合MDM2 3'-UTR。RT-qPCR 和 Western blot 结果显示 miR-379-5p 可明显抑制MDM2在T24和EJ细胞内的mRNA和蛋白的表达水平。这些结果证实MDM2是miR-379-5p的靶基因。4、在T24和EJ细胞中敲低MDM2表达后,细胞的增殖、迁移和侵袭明显受到抑制。5、回复实验结果显示共转染MDM2高表达质粒后可以将被miR-379-5p抑制的细胞增殖、迁移及侵袭能力恢复到miR-NC处理组的水平。结果表明,MDM2参与介导miR-379-5p抑制膀胱癌细胞增殖、迁移和侵袭过程。6、RT-qPCR结果表明,和癌旁组织相比,MDM2mRNA在膀胱癌组织中的表达水平显著上升。利用Western blot检测MDM2在膀胱癌组织和癌旁组织中MDM2蛋白的表达情况。结果显示:在膀胱癌组织中,MDM2蛋白表达明显上调。同时分析发现miR-379-5p与MDM2 mRNA在膀胱癌组织中表达呈负相关关系结论miR-379-5p在膀胱癌组织及细胞中的表达显著下调。miR-379-5p通过靶向调控MDM2的表达来抑制膀胱癌细胞的增殖、迁移和侵袭能力。
[Abstract]:The expression of miR - 379 - 5p in bladder cancer , including lung cancer , breast cancer , gastric cancer and bladder cancer , has been detected by RT - qPCR . The expression of miR - 379 - 5p in bladder cancer tissues was significantly lower than that of normal human bladder epithelial cells ( SV - HUC - 1 ) . The results showed that the expression of miR - 379 - 5p in bladder cancer tissues was significantly lower than that of normal human bladder epithelial cells ( SV - HUC - 1 ) .

【学位授予单位】：南京医科大学
【学位级别】：博士
【学位授予年份】：2017
【分类号】：R737.14

【参考文献】