超保守RNA uc.160与miR-155-5p在胃癌中的表达及相互关系研究

发布时间：2018-04-05 22:18

本文选题：miR-155-5p　切入点：uc.160　出处：《扬州大学》2015年硕士论文

【摘要】：[目的]胃癌是我国最常见的恶性肿瘤之一,其早期诊断和治疗并不理想。我们前期研究提示miR-155-5p在胃癌中的表达显著降低,通过生物信息学检索我们还发现超保守RNAuc.160与miR-155-5p在序列上存在互补序列,而uc.160在胃癌中的表达情况及其功能尚未知晓,因此本研究主要明确uc.160和miR-155-5p在胃癌中的表达是否存在差异和两者在胃癌发生发展中的功能以及它们之间的相互关系。[方法]1、首先,运用RT-PCR的实验方法检测胃癌细胞系和正常胃黏膜上皮细胞系中miR-155-5p和uc.160的表达。2、构建miR-155-5p和uc.160的逆转录病毒表达质粒。分别瞬时转染胃癌细胞,使miR-155-5p和uc.160在胃癌细胞系中过表达。运用RT-PCR的实验方法检测高表达miR-155-5p的胃癌细胞系中uc.160表达的变化。同时检测过表达uc.160的胃癌细胞系中miR-155-5p的表达。3、生物信息学方法检索出uc.160基因组序列中含有若干miR-155-5p的结合位点,这些结合位点分别位于uc.160的成熟序列及其基因组序列中。选取3段含有miR-155-5p结合位点和1段不含miR-155-5p结合位点的uc.160序列,分别将之克隆至荧光素酶报告基因质粒的3’端。将miR-155-5p表达质粒与重组荧光素酶报告基因质粒共转染细胞,双荧光素酶报告基因检测方法检测miR-155-5p对含有uc.160序列的荧光素酶报告基因的调节作用。4、通过体外、体内实验了解miR-155-5p和uc.160分别对胃癌细胞增殖、凋亡的影响。体外实验：胃癌细胞分别过表达miR-155-5p和uc.160后,通过流式细胞仪动态检测GFP阳性细胞数目、通过细胞计数板计数动态计数细胞增殖数目；胃癌细胞分别过表达miR-155-5p和uc.160后,流式细胞技术检测细胞凋亡情况。体内实验：胃癌细胞分别过表达miR-155-5p和uc.160后,接种于SCID小鼠皮下,观察每组小鼠成瘤情况。[结果]1、胃癌细胞(7901、AGS、803)中miR-155-5p 的表达低于正常胃粘膜上皮细胞中的表达,而uc.160在胃癌细胞中的表达高于正常胃黏膜上皮细胞中的表达。2、胃癌细胞过表达miR-155-5p后,uc.160的表达明显降低,而过表达uc.160后测miR-155-5p的表达改变不大。3、双荧光素酶报告基因检测显示含有miR-155-5p结合位点的uc.160序列与没有结合位点的序列相比,荧光素酶报告基因活性显著降低。4、miR-155-5p和uc.160对胃癌细胞生长情况的影响。在胃癌细胞(7901、AGS、803)细胞中转染miR-155-5p后2天、4天、6天及8天,利用流式细胞技术检测GFP阳性细胞数目,由于所转染的miR-155-5p表达载体上均带有GFP基因,因此GFP阳性细胞数目的增多或减少反应外源表达基因对细胞的影响。结果发现过表达miR-155-5p导致胃癌细胞数目呈减少趋势。同时细胞计数也反应过表达miR-155-5p后癌细胞的增长比没有过表达的癌细胞增长慢。而过表达uc.160后癌细胞的增长也变慢。5、miR-155-5p和uc.160对胃癌细胞凋亡情况的影响。在胃癌7901细胞中转染miR-155-5p或uc.160在转染后48小时,测得细胞早期凋亡百分数增加。6、miR-155-5p和uc.160对小鼠成瘤的影响。四组小鼠(每组四只)分别皮下种入106个胃癌7901细胞、7901-MSCV-pig细胞、7901-miR-155-5p细胞、7901-uc.160细胞,一个月后7901细胞组小鼠最先成瘤,接着7901-MSCV-pig细胞组小鼠成瘤,最后7901-miR-155-5p细胞、7901-uc.160细胞组小鼠陆续成瘤,而最后两组小鼠不仅瘤小而且各有一只小鼠未成瘤。[结论]miR-155-5p和uc.160基因通过交互作用发挥抑制胃癌细胞生长增殖的抗癌作用。
[Abstract]:The expression of miR - 155 - 5p and miR - 155 - 5p in gastric cancer cells was detected by RT - PCR .
The expression of miR - 155 - 5p and uc.160 in gastric cancer cells was significantly lower than that in normal gastric mucosa .

【学位授予单位】：扬州大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：R735.2

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