Oct-4在肝细胞肝癌中的表达及其在恶性生物学行为中的作用研究

发布时间：2018-04-10 08:54

  本文选题：肝细胞肝癌　切入点：八聚体转录因子4　出处：《南京医科大学》2016年博士论文

【摘要】：背景：肝癌全球发病率逐年上升,但相对预后不良,尽管基础和临床研究取得长足发展,但总体仍缺乏有效手段来提高肝癌患者的预后。肝癌患者术后复发转移是影响预后的最重要因素,所以研究肝癌的侵袭转移机制对提高肝癌预后有极其重要的意义。Oct-4是一种核转录因子,常表达与胚胎干细胞,其异常高表达见于多种肿瘤。Oct-4异常高表达可增加干细胞转变为恶性肿瘤细胞的潜能。上皮细胞到间质细胞的转化(EMT)在各种癌症的进展,包括肝细胞癌进展中有促进作用。但Oct-4表达与HCC患者预后是否相关以及与HCC中EMT过程是否相关仍是未知的。目的：研究肝癌组织及匹配的癌旁组织中Oct-4的表达；探讨Oct-4的表达和肝癌患者的预后的相关性。体外实验探讨Oct-4基因对肝癌细胞恶性生物学行为的作用。方法：1、定量RT-PCR和免疫印迹检测44对肝癌及其相对应的癌旁组织标本中Oct-4 mRNA及蛋白的表达水平,分析Oct-4表达与肝癌预后的相关性。2、定量RT-PCR和免疫印迹检测4个肝癌细胞株SMMC-7721、Bel-7404、 Huh-7、HepG2和正常肝细株HL-7702中Oct-4的表达,挑选高表达Oct-4的细胞株。3、采用Oct-4特异的siRNA,转染高表达Oct-4的肝癌细胞株,构建Oct-4表达下调的稳转肝癌细胞株,利用免疫印迹实验检测转染后Oct-4蛋白及EMT过程中蛋白标志物的表达情况；利用CCK8检测转染后细胞增殖能力的变化；利用Transwell实验检测转染后细胞迁移、侵袭能力的变化。结果：1、与相对应的癌旁组织相比,Oct-4在肝癌组织中呈高表达。在44例肝癌及44例相匹配的癌旁组织中,有35例肝癌组织Oct-4呈阳性表达(35/44,79.55%),相对应的癌旁组织中仅有21例呈低浓度阳性表达(21/44,47.72%)。经卡方检验,癌组织中Oct-4的表达显著高于癌旁组织(P0.01)。2、Oct-4 mRNA的表达与肝癌大小、血管侵犯、TNM分期相关(P0.05)。单因素分析发现Oct-4 mRNA阳性患者具有较低的总生存率及无瘤生存率。多因素分析发现Oct-4 mRNA的表达并非肝癌患者术后总生存率及无瘤生存率的独立影响因素。3、4个肝癌细胞株SMMC-7721、Bel-7404、Huh-7、HepG2和正常肝细株HL-7702中Oct-4 mRNA及蛋白的表达情况,结果显示：肝癌细胞SMMC-7721和HepG2中Oct-4呈高表达,正常肝细株HL-7702中Oct-4呈低表达。4、细胞增殖实验表明下调Oct-4的表达能够抑制肝癌细胞株SMMC-7721和HepG2的增殖。Transwell实验表明Oct-4下调能明显抑制肝癌细胞的迁徙、侵袭能力。免疫印迹实验证明稳转肝癌细胞株Oct-4的表达下降,而EMT相关表达物E-钙粘蛋白上调、波形蛋白和N-钙粘蛋白表达下调。结论：1、肝癌组织和人肝癌细胞系中在mRNA水平和蛋白水平高表达Oct-4基因。其高表达水平与较大的肿瘤体积、较多的血管侵犯和较高的TNM分期正相关,提示Oct-4在肿瘤增殖、侵袭转移中可能扮演重要的角色2、单因素分析Oct-4基因与肝癌患者术后预后相关,阳性患者具有较低的总生存率及无瘤生存率。多因素分析提示Oct-4 mRNA的表达不是一个独立的预后不良因素。肝细胞癌中Oct-4 mRNA表达可作为术后患者预后预测的参考指标。3、本研究通过建立下调Oct-4基因表达的2株稳转肝癌细胞系,从体外水平,证明了Oct-4基因在肝癌细胞的增殖、迁移、侵袭恶性生物学行为中的起着促进的作用。4、Oct-4基因表达与EMT标志基因的表达正相关,为深入研究Oct-4基因在肝细胞癌中作用的分子机制奠定基础,有利于寻找并阻断肝细胞癌转移及复发的特异性靶点。
[Abstract]:BACKGROUND : The global incidence of liver cancer has been increasing year by year , but relatively poor prognosis . Although the basic and clinical studies have made long term development , there is still a lack of effective means to improve the prognosis of patients with liver cancer . Oct - 4 is a kind of nuclear transcription factor , often expressed as embryonic stem cells . The abnormal high expression of Oct - 4 is the most important factor affecting the prognosis of HCC .
Methods : 1 銆，

本文编号：1730528