盘状结构域受体1调控上皮—间质转化影响胃癌侵袭转移分子机制的研究

发布时间：2018-04-12 06:02

本文选题：胃癌 + DDR1　；参考：《兰州大学》2015年硕士论文

【摘要】：目的观察DDRl是否通过调控上皮-间质转化影响胃癌细胞的侵袭转移,并探讨其可能的分子机制。方法(1)运用免疫组化法筛选DDRl高表达及低表达胃癌细胞株。(2)构建DDRl靶向siRNA,瞬时转染siRNA于DDR1高表达胃癌细胞,RT-PCR及Western Blot法检测DDR1在转染前后的表达情况。应用MTT法、Transwell法及流式细胞法检测转染前后胃癌细胞的增殖、迁移侵袭能力、细胞周期及凋亡的变化。Western Blot法检测转染前后EMT相关蛋白E-cadherin及Vimentin的表达变化,并检测EMT相关信号蛋白Snail的表达。(3)构建DDRl重组慢病毒稳定转染DDR1低表达胃癌细胞以过表达胃癌细胞DDR1, RT-PCI及Western Blot法检测DDRl在转染前后的表达情况。应用MTT法、平板克隆形成实验、Transwell法以及流式细胞法分别检测过表达DDR1对胃癌细胞增殖、迁移、侵袭和细胞周期及凋亡的影响。Western Blot法检测转染前后EMT相关蛋白E-cadherin及Vimentin的表达变化,并检测EMT相关信号蛋白Snail的表达。(4)裸鼠背部皮下注射携带GFP的DDR1重组慢病毒稳转的BGC-823细胞构建裸鼠移植瘤模型,2×106细胞裸鼠皮下接种,分别于7d、21d、5d、49d行小动物活体成像以测定移植瘤大小,观察DDRl过表达对裸鼠体内胃癌移植瘤生长的影响,49d处死裸鼠,取瘤体观察其组织细胞形态和血管生成相关蛋白CD34的表达情况。结果(1)对胃癌细胞MKN-45、BGC-823、SGC-7901及正常胃粘膜细胞GES-1免疫组织化学分析结果显示：胃癌细胞DDRl表达均为阳性,而正常胃粘膜细胞GES-1表达呈阴性；DDR1在胃癌细胞MKN-45中表达最强而在BGC-823中表达最弱。(2) RT-PCR及Western Blot结果显示DDR1-siRNA转染胃癌细胞MKN-45后,DDRl在该细胞的表达明显下降(p0.05),而DDRl重组慢病毒稳定转染BGC-823后,DDRl在BGC-823细胞的表达明显增加(p0.01)。(3)MTT结果显示,阻断MKN-45 DDRl的表达明显抑制了MKN-45的增殖(p0.05),而DDR1在BGC-823的过表达明显增加了BGC-823的增殖(p0.01)；平板单克隆形成实验显示,DDR1过表达后BGC-823细胞单克隆形成能力明显增强(p0.05)。(4)流式细胞仪测定结果显示,增加或抑制DDR1在胃癌细胞的表达不能导致细胞周期的改变(p0.05),对胃癌细胞凋亡也无影响(p0.05)。(5) Transwell小室迁移及侵袭实验证实,MKN-45细胞在DDRl阻断后穿过膜的细胞数目明显减少(p0.01),而BGC-823细胞在DDR1过表达后穿膜的细胞数目明显增加(p0.01)。(6)蛋白免疫印迹结果显示,抑制DDR1在胃癌细胞MKN-45的表达导致上皮间质转化相关蛋白E-cadherin表达增加(p0.01)、Vimentin表达下降(p0.05),信号相关蛋白Snail表达下降(p0.05)；DDRl在胃癌细胞的过表达则导致相反的结果。(7)动物实验显示,DDR1过表达后BGC-823细胞在裸鼠皮下移植瘤的生长速度明显加快(p0.05),瘤体组织免疫组化染色显示CD34在DDR1过表达组表达明显增加(p0.01)。结论(1)DDR1的表达可促进胃癌细胞的增殖、迁移及侵袭能力,提示DDR1有可能成为胃癌治疗的靶点。(2)DDR1在胃癌的表达对胃癌细胞的细胞周期和凋亡无明显影响。(3)DDR1可能通过激活Snail信号通路促进胃癌细胞的上皮间质转化,进而影响胃癌的侵袭转移。(4)DDR1能够促进胃癌细胞体内移植瘤的生长,并且能够促进移植瘤微血管的形成。
[Abstract]:The expression of EMT - related protein E - cadherin and vimentin was detected by Western Blot . The expression of EMT - related protein E - cadherin and vimentin was detected by Western Blot . The results showed that the expression of EMT - related protein E - cadherin and vimentin was detected by Western Blot .
( 2 ) The expression of MKN - 45 DDRl significantly decreased ( P < 0.01 ) .
( 4 ) Flow cytometry showed that the proliferation of MKN - 45 cells in gastric cancer cells could not result in the change of cell cycle ( p0.01 ) .
Conclusion ( 1 ) DDR1 can promote the proliferation , migration and invasion of gastric cancer cells . ( 3 ) DDR1 may promote the growth of gastric cancer cells and promote the invasion and metastasis of gastric cancer cells .

【学位授予单位】：兰州大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：R735.2

【共引文献】