miR-18a通过调控SEMA5A影响胃癌细胞的增殖与迁移
本文选题：miR-17-92 + miR-18a ； 参考：《重庆医科大学》2015年硕士论文
【摘要】：MiRNA是内源的非编码小RNA,长约22-23bp,可以结合到基因的3‘UTR区域,形成沉默复合物,抑制mRNA的翻译或者降解mRNA。近些年,众多研究都揭示了miRNA在细胞增殖、凋亡、器官发育、肿瘤的发生和转移等众多生命活动中起着重要作用。MiRNA-17-92是高度保守的多顺反子miRNA基因簇,编码6种miRNA,调控多种靶基因的表达,而这些靶基因在生物的发育过程起着关键作用,对它的深入研究有着重要意义。SEMA5A可以与它的受体PLXNB3结合,参与调控轴突的导向,并与多种细胞的增殖、凋亡、细胞迁移等生理功能相关。本研究根据生物信息学预测SEMA5A是miRNA-17-92的潜在靶基因,并通过双荧光素酶报告基因实验分析证明与miRNA-17-92家族成员miR-18a的相互作用。运用实时定量荧光PCR和Western Blot证明在胃癌细胞MKN45中过表达miR18a会导致SEMA5A的mRNA和蛋白水平表达的下调。细胞增殖实验和细胞迁移实验发现,过表达的miR18a可以抑制MKN45细胞的增殖和迁移,而同时过表达SEMA5A,可以在一定程度上恢复MKN45细胞的增殖和迁移能力；说明miR18a可能是通过调控SEMA5A,抑制MKN45细胞的增殖和迁移。但流式细胞检测凋亡法检测发现,过表达miR18a对MKN45细胞的凋亡没有影响。
[Abstract]:MiRNA is an endogenous non-coding small RNAs, about 22-23bp. it can bind to the 3'UTR region of the gene, form silencing complex, inhibit the translation of mRNA or degrade mRNA.In recent years, many studies have revealed that miRNA plays an important role in many life activities, such as cell proliferation, apoptosis, organ development, tumorigenesis and metastasis. MiRNA-17-92 is a highly conserved miRNA gene cluster.It encodes six kinds of miRNAs to regulate the expression of many target genes, and these target genes play a key role in the development of organisms. The further study of them is of great significance. SEMA5A can bind to its receptor PLXNB3 and play an important role in regulating the orientation of axons.And related to many kinds of cell proliferation, apoptosis, cell migration and other physiological functions.In this study, we predicted that SEMA5A is a potential target gene of miRNA-17-92 based on bioinformatics, and demonstrated the interaction with miR-18a, a member of miRNA-17-92 family, by the experimental analysis of double luciferase reporter gene.Using real-time quantitative PCR and Western Blot, it was proved that overexpression of miR18a in MKN45 of gastric cancer cells resulted in down-regulation of mRNA and protein levels of SEMA5A.Cell proliferation assay and cell migration assay showed that overexpression of miR18a could inhibit the proliferation and migration of MKN45 cells, while overexpression of SEMA5A could restore the proliferation and migration ability of MKN45 cells to a certain extent.The results suggest that miR18a may inhibit the proliferation and migration of MKN45 cells by regulating SEMA 5 A.However, flow cytometry showed that overexpression of miR18a had no effect on apoptosis of MKN45 cells.
【学位授予单位】：重庆医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：R735.2
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，本文编号：1739767
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