RNF113A在哈萨克族食管鳞癌中的作用及其功能研究

发布时间：2018-04-14 01:40

  本文选题：食管鳞癌 + RNF113A　； 参考：《新疆医科大学》2017年博士论文

【摘要】：目的:探讨环指蛋白113A(RNF113A)基因参与食管癌细胞凋亡、增殖、迁移、侵袭等生物学行为的影响及在食管癌中的作用;通过分析哈族食管鳞癌组织中RNF113A表达水平与食管癌临床恶性表型间的关系,为新疆哈萨克族食管癌临床早期诊断及个体化治疗奠定理论基础。方法:1)采用免疫组织化学法在组织水平检测117例哈萨克族食管鳞癌组织及配对癌旁正常食管组织中RNF113A的表达,及RNF113A的表达与p53表达的关系;实时荧光定量PCR(q RT-PCR)检测41例哈族食管鳞癌组织及配对癌旁正常食管组织RNF113A的mRNA表达情况。分析RNF113A的表达与各临床病理参数(患者年龄、性别、分化程度、T分期、淋巴结转移、组织类型、肿瘤部位)的关系。分析RNF113A的表达与哈萨克族食管鳞癌预后的相关性;2)针对RNF113A的cDNA序列,我们合成了小干扰RNA(siRNA)和真核过表达载体,并转染食管鳞状细胞癌(ESCC)细胞系;运用qRT-PCR技术和western-blot技术检测转染干扰和过表达载体后RNF113A表达水平的变化;运用流式细胞仪检测细胞周期和凋亡;运用Transwell实验和细胞划痕实验检测RNF113A干扰和过表达后对ESCC细胞系迁移的变化,运用Transwell实验检测RNF113A干扰或过表达后ESCC细胞系侵袭的变化;3)构建了RNF113A慢病毒干扰载体,转染Eca109细胞,建立了稳定转染RNF113A敲低的Eca109细胞系。分别将转染有sh-scramble及sh-RNF113A细胞及正常培养的Eca109细胞接种于裸鼠皮下,构建Eca109细胞裸鼠皮下荷瘤模型,每周称重1次,并观察瘤块的生长情况。瘤块长出后,用游标卡尺测量裸鼠瘤块长径(A)及垂直横径(B),按公式V=A×B2/2计算裸鼠肿瘤体积,并绘制肿瘤体积增长曲线及体质量曲线。处死后采用qRT-PCR和免疫组织化学法检测裸鼠瘤块组织中RNF113A的表达。结果:第一部分:免疫组织化学检测RNF113A蛋白表达情况。在117哈族ESCC组织中,74例(63.25%)RNF113A呈阳性表达,RNF113A在哈萨克族食管鳞癌组织中呈现高表达,明显高于配对癌旁正常食管组织(P=0.000)。RNF113A和p53的表达在哈族食管鳞癌组织呈显著正相关(P=0.035)。qRT-PCR检测41例哈族食管鳞癌组织及配对癌旁正常食管组织RNF113A的mRNA表达情况,癌组织中表达量是癌旁正常组织中表达量均值的2倍。哈族食管癌组织中RNF113A表达与临床病理指标间的相关性分析显示,分化程度(P=0.008)和T分期(P=0.000)、淋巴结转移(P=0.017)与RNF113A表达显著相关,而RNF113A表达与性别、年龄、组织类型、肿瘤部位之间差异无统计学意义。Kaplan Meier的生存曲线表明,RNF113A阴性表达的食管癌患者比RNF113A阳性表达的患者生存期长。采用Cox比例风险单因素分析表明RNF113A表达和T分期、淋巴结转移是影响哈族ESCC的预后因素。多因素分析表明RNF113A表达、淋巴结转移是哈萨克族食管癌患者总生存率的独立危险因素。第二部分:在体外ESCC细胞水平,沉默RNF113A基因后,G0/G1期细胞数显著增加,S期细胞数显著减少,G2/M期细胞显著减少,抑制增殖;过表达RNF113A基因后,G0/G1期细胞数显著减少,S期细胞数变化不明显,G2/M期细胞显著增加,促进增殖。RNF113A siRNA转染Eca109及EC9706细胞后细胞凋亡率显著上升;RNF113A过表达质粒转染后,各组间细胞凋亡率无差异。干扰RNF113A能抑制Eca109、EC9706细胞的迁移和侵袭能力;过表达RNF113A能显著促进ESCC细胞的迁移和侵袭能力。第三部分:通过人食管癌Eca109细胞株裸鼠移植瘤动物模型的成功建立,结果显示sh-RNF113A组裸鼠的瘤块体积及重量都比对照组小,说明干扰RNF113A的表达后减缓了裸鼠的成瘤能力。sh-RNF113A组裸鼠瘤块组织中RNF113A的蛋白和mRNA表达明显降低,提示RNF113A能提高食管癌细胞的生长能力,促进肿瘤细胞生长。结论:RNF113A在哈萨克族食管鳞癌中高表达,RNF113A表达与分化程度、T分期和淋巴结转移、预后显著相关。RNF113A能抑制食管鳞癌细凋亡,影响细胞周期,促进增殖、迁移和侵袭。在裸鼠荷瘤的动物水平,RNF113A在体内能够促进肿瘤生长,发挥着癌基因的作用。
[Abstract]:Objective : To investigate the relationship between the expression of RNF113A and the expression of RNF113A in esophageal squamous cell carcinoma . The results showed that RNF113A could inhibit the proliferation , proliferation , migration and invasion of Eca109 and EC9706 cells . The results showed that RNF113A could inhibit the proliferation , migration and invasion of Eca109 and EC9706 cells .

【学位授予单位】：新疆医科大学
【学位级别】：博士
【学位授予年份】：2017
【分类号】：R735.1

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本文编号：1747177