TROP2在肺腺癌中的表达及其意义

发布时间：2018-04-15 15:07

本文选题：肺腺癌 + 免疫组化　；参考：《南昌大学》2016年博士论文

【摘要】：第一章:TROP2在肺腺癌组织中的表达及其与临床病理特征的关系目的:探讨TROP2在人肺腺癌细胞系、人肺腺癌组织中的表达及其临床意义。方法:免疫组织化学方法检测68例肺腺癌组织其中包含有20例癌旁组织的TR OP2的表达,用统计学方法分析其与临床病理特征的相关性;RT-q PCR检测标本:38例肺腺癌组织及其癌旁组织和肺腺癌细胞系H1299、SPCA-1、PC-9、A549及正常人支气管上皮细胞株HBE中TROP2 m RNA的表达情况,Western Blot检查肺腺癌细胞株中TROP2蛋白的表达情况。结果:1、TROP2在癌旁组织未见或少见表达,支气管黏膜、肺泡壁是其表达的主要部位,其阳性表达率为15%(3/20)。TROP2在肺腺癌组织中表达于肿瘤细胞的胞浆和胞膜,为大小不等的棕黄颗粒,细胞核不着色;TROP2的阳性表达率为54.4%(38/68);肺腺癌组TROP2阳性表达率高于癌旁组织组(P=0.0002)。在肺腺癌组中,TROP2的表达与肿瘤的分化程度(P=0.013)、淋巴结转移(P=0.038)及TNM分期(P=0.012)表现出正相关性,而与年龄、性别、肿瘤大小及肿瘤T分期呈现出无相关性(P=0.584,0.112,0.685,0.414);2、癌旁组织中TROP2m RNA的相对表达量为(0.159±0.009),而TROP2 m RNA在肺腺癌组织中相对表达量为(1.153±0.077),明显高于癌旁组织中的表达量(P0.005)。3、RT-q PCR检测肺腺癌细胞系中TROP2 m RNA表达,结果显示:TROP2的表达量由高到低依次为:PC-9SPCA-1H1299A549HBE。Western Blot检测TROP2蛋白表达,结果显示:TROP2的表达量由高到低依次为PC-9SPCA-1H1299A549HBE。结论:1、TROP2在肺腺癌组织中高表达,与癌旁组织中的表达比较存在统计学差异(P=0.0002);2、TROP2的表达与肿瘤的分化程度(P=0.013)、淋巴结转移(P=0.038)及TNM分期(P=0.012)表现出正相关性,而与年龄、性别、肿瘤大小及肿瘤T分期呈现出无相关性;3、TROP2在肺腺癌细胞系中高表达,在PC-9细胞中更高。第二章:TROP2基因表达质粒和TROP2-shRNA质粒构建及肺腺癌细胞株的筛选目的:为了进一步研究肺腺癌中TROP2的作用机制,我们构建TROP2基因表达质粒pc DNA3.1-TROP2和干扰质粒sh RNA-TROP2质粒,并构建TROP2高/低表达肺腺癌细胞模型。方法:1、通过基因克隆技术获得人TROP2基因cDNA序列,然后将该cDNA序列经克隆,酶切,并连接到载体pc DNA3.1上,构建TROP2基因表达质粒pc DNA3.1-TROP2,并构建过表达TROP2的肺腺癌A549稳转细胞系,利用RT-q PCR及免疫印迹法鉴定表达产物;2、针对人TROP2基因设计三条sh RNA后,应用PLKO.1载体构建TROP2-sh RNA干扰质粒,用脂质体转染技术转染PC-9细胞并进行RT-q PCR及免疫印迹法鉴定表达产物,筛选出干扰效果最佳的sh R NA。并构建低表达TROP2的肺腺癌细胞模型。结果:1、成功构建pc DNA3.1-TROP2表达质粒;2、以A549细胞为基础成功构建了稳定过表达TROP2的肺腺癌细胞系模型;3、成功构建TROP2干扰质粒T ROP2-sh RNA,经Western Blot及RT-q PCR鉴定显示TROP2-sh RNA-2的干扰效果最好;4、将TROP2-sh RNA-2转染到PC-9肺腺癌细胞中,成功构建了低表达TROP2的肺腺癌癌细胞模型。结论:成功构建pc DNA3.1-TROP2表达质粒和TROP2-sh RNA干扰质粒,并经瞬时转染后鉴定出干扰效果最佳的sh RNA。并构建TROP2基因过表达和低表达的肺腺癌细胞模型。第三章:TROP2对肺腺癌细胞体外生物学特性的影响目的:研究TROP2对肺腺癌癌细胞体外生物学特性的影响。方法:利用本研究第二章建立的TROP2表达质粒pcDNA3.1-TROP2,构建过表达TROP2的肺腺癌A549细胞模型及TROP2干扰质粒TROP2-sh RNA,构建低表达TROP2的肺腺癌癌细胞模型。采用CCK-8法检测、划痕实验、细胞侵袭实验及细胞凋亡实验,体外观察TROP2表达改变后,对肺腺癌细胞增殖、迁移、侵袭及凋亡等生物学特性的影响。结果:CCK-8法检测证实过表达TROP2促进A549细胞的增殖,抑制TROP2表达后能够抑制肺腺癌细胞PC-9的增殖;划痕实验证实过表达TROP2能够加快A549细胞的迁移能力,抑制TROP2表达后能够减弱PC-9细胞的迁移能力;细胞侵袭实验(Transwell小室)表明TROP2过表达后能有效促进A549细胞的侵袭能力,干扰TROP2表达后能有效抑制PC-9细胞的侵袭能力;凋亡实验结果:TROP2过表达后能有效抑制A549细胞的细胞凋亡,干扰TROP2表达后能有效促进PC-9细胞的细胞凋亡;结论:TROP2具有促进肺腺癌细胞增殖、迁移及侵袭的作用,并有效地抑制了肺腺癌细胞的凋亡。
[Abstract]:The expression of TROP2 mRNA in lung adenocarcinoma cell line was detected by Western Blot . The expression of TROP2 in lung adenocarcinoma was higher than that in adjacent tissues ( P = 0 . 584 , 0 . 112 , 0 . 685 , 0 . 414 ) . In order to study the mechanism of TROP2 gene expression plasmid pcDNA 3.1 - TROP2 and to construct a cell model of lung adenocarcinoma cell line with low expression TROP2 , we constructed a model of TROP2 gene expression plasmid pcDNA 3.1 - TROP2 and constructed a cell model of lung adenocarcinoma cell line with low expression TROP2 . The effects of TROP2 on cell proliferation , migration , invasion and apoptosis of lung adenocarcinoma cells were studied by means of CCK - 8 assay .

【学位授予单位】：南昌大学
【学位级别】：博士
【学位授予年份】：2016
【分类号】：R734.2

【相似文献】