AHVAC-Ⅰ诱导人胃癌细胞SGC-7901线粒体凋亡途径的研究

发布时间：2018-04-21 22:40

  本文选题：蛇毒 + SGC-7901细胞　； 参考：《皖南医学院》2017年硕士论文

【摘要】：目的:探讨皖南蝮蛇抑瘤组分Ⅰ(Agkistrodon Halys venom antitumor component-I,AHVAC-Ⅰ)诱导人胃癌细胞SGC-7901线粒体凋亡途径的具体作用机制。方法:本实验选择SGC-7901细胞作为研究的对象,体外条件下进行常规传代培养。选择不同浓度的AHVAC-Ⅰ作用于SGC-7901并在显微镜下观察其形态变化。结合MTT实验结果确定后续AHVAC-Ⅰ药物浓度低、中、高组分别为3、10、20μg/ml。实验分组:正常对照组(配药所用的培养基)、3μg/ml组、10μg/ml组、20μg/ml组、CsA+10组(CsA为线粒体转运孔关闭剂)。1、各组与SGC-7901细胞作用6h后JC-1检测起线粒体膜电位(△Ψm)的改变。2、各组与SGC-7901细胞作用24h后采用流式细胞仪分别检测各组细胞凋亡率。3、收集正常对照组、3μg/ml组、10μg/ml组、20μg/ml组作用24h后的细胞检测蛋白Caspase-3、Caspase-9的活性,利用细胞免疫组化法和蛋白印迹法检测Cyt-c、Caspase-3、Caspase-9在蛋白水平的表达情况。结果:1、倒置显微镜下见正常对照组细胞贴壁生长,且贴壁较为紧密,形态为不规则多边形,核分裂像较多。经AHVAC-I处理24h后,随AHVAC-I浓度增加细胞密度逐渐稀疏,细胞悬浮、固缩等凋亡现象逐渐增加。3μg/ml组的形态基本是多边形,但可以看见细胞边缘变亮,细胞的贴壁率有所下降,10μg/ml组可见细胞体积缩小,固缩变圆,细胞间隙变大,出现凋亡小体,而20μg/ml组可见细胞抱团体呈现小、圆、亮的特征,可见较多的凋亡小体。2、MTT实验结果提示在24h时实验组随AHVAC-Ⅰ浓度的增加(3~30μg/ml)细胞增殖抑制率呈上升趋势,(P0.05)。3、JC-1线粒体膜电位检测结果提示与对照组比较AHVAC-I处理6h后蛇毒组的△Ψm均显著降低而CsA+10μg/ml组与10μg/ml组比较线△Ψm下降程度较小。荧光显微镜观察可见随浓度得而增加红光逐渐减弱而绿光逐渐增强,20μg/ml组可见△Ψm照片基本全呈现绿色荧光,而CsA+10组与10μg/ml组比较绿色荧光较弱。4、随AHVAC-Ⅰ浓度增加(3~20μg/ml)细胞凋亡率逐渐增加而CsA+10组与10μg/ml比较凋亡率较低(P0.05)。5、Caspase-3,Caspase-9活性检测结果提示随蛇毒作用浓度的增加(3~20μg/ml)Caspase-3,Caspase-9活性明显增加(P0.05)。6、细胞免疫组化及western-blot结果均提示随蛇毒作用浓度的增加(3~20μg/ml)胞浆里的Cyt-c蛋白水平表达为上升趋势(P0.05),Caspase-3,Caspase-9的蛋白表达水平随AHVAC-I浓度的增加(3~20μg/ml)而逐渐增加(P0.05)。结论:1、AHVAC-I能够抑制人胃癌细胞SGC-7901的生长增殖。2、AHVAC-I对人胃癌SGC-7901的作用途径之一是诱导线粒体功能障碍引起的细胞凋亡,且此凋亡可以通过阻碍PTP孔开放减少线粒体膜电位的降低而降低。3、AHVAC-I对人胃癌SGC-7901的作用与Cyt-c、Caspase-3、Caspase-9的含量有关。
[Abstract]:Aim: to investigate the mechanism of apoptosis pathway of SGC-7901 mitochondria induced by Agkistrodon Halys venom antitumor component-AHVAC- 鈪，

本文编号：1784418