miR-127对肺癌进展的调控作用及其机制研究

发布时间：2018-04-23 06:57

本文选题：micro + RNA　；参考：《杭州师范大学》2015年硕士论文

【摘要】：目的:通过体内外实验证明mi R-127参与肺癌的发生与发展;探明mi R-127在肺癌中的重要调控功能;深入研究mi R-127对于肺癌进展的分子调控机制。方法:1.分别用原位杂交和Real time PCR方法检测人肺癌组织标本和不同人肺癌细胞系中mi R-127的表达;分别建立mi R-127过表达的PC9细胞和mi R-127敲减的A549稳定转染细胞系,并用Real time PCR方法检测稳定转染细胞系中mi R-127的变化水平。2.Real time PCR和Western blot方法检测PC9细胞过表达mi R-127和A549细胞敲减mi R-127后EMT相关的分子标志物的表达差异。3.体外转移和侵袭实验检测PC9细胞过表达miR-127和A549细胞敲减miR-127后,肿瘤细胞的转移和侵袭能力的变化。4.肿瘤干性实验和软琼脂实验检测PC9细胞过表达mi R-127和A549细胞敲减mi R-127后,肿瘤细胞的肿瘤干性与克隆形成率。MTS和Western blot方法检测PC9细胞过表达mi R-127和A549细胞敲减mi R-127后,对于Gefitinib诱导细胞凋亡的敏感性的变化,及对于Gefitinib所引起AKT和ERK的磷酸化水平的改变。裸鼠成瘤实验检测mi R-127过表达的PC9细胞和mi R-127敲减的A549细胞系与对照组相比的成瘤能力,用免疫组织化方法检测Vimentin、Ki67、MMP9和TNFAIP3在裸鼠肿瘤组织中的表达。5.Real time PCR和Western blot方法检测PC9细胞过表达miR-127和A549细胞敲减mi R-127前后,TNFAIP3的表达的变化;双荧光素酶报告基因检测mi R-127对TNFAIP3的直接靶向抑制作用。6.Western blot的方法检测PC9及A549细胞过表达及抑制mi R-127前后,经TNF-α作用后NF-κB信号通路相关蛋白IKKα/β、IκBα及p65的磷酸化水平的变化及RIP1的K63泛素化水平的变化。7.体外转移实验、侵袭实验、MTS实验及Western blot的方法检测TNFAIP3对mi R-127调控肺癌过程的作用。结果:1.人肺癌组织与人肺癌细胞系中,mi R-127异常高表达。2.PC9细胞过表达miR-127后,上皮细胞标志分子E-Cadherin显著下调,间质细胞标志分子N-Cadherin、ZEB1和Vimentin显著上调。A549细胞敲减mi R-127后,上皮细胞标志分子E-Cadherin显著上调,间质细胞标志分子N-Cadherin、ZEB1和Vimentin显著下调。3.PC9细胞过表达miR-127后,细胞的转移和侵袭能力显著增加;而A549细胞敲减mi R-127后,细胞的转移和侵袭能力显著减弱。4.mi R-127促进PC9细胞的肿瘤干性,同时促进了体内肿瘤细胞的生长;而敲减mi R-127的A549细胞肿瘤干性减弱,体内的肿瘤细胞生长减缓。Gefitinib降低PC9和A549细胞的磷酸化水平,从而抑制肿瘤细胞的生长。mi R-127过表达的PC9细胞与对照组相比,对于Gefitinib诱导细胞凋亡的敏感性降低,同时上调了AKT与ERK的磷酸化水平;而敲减mi R-127后,A549细胞凋亡增加,AKT与ERK的磷酸化水平显著下调。mi R-127上调Vimentin、Ki67、MMP9等蛋白的表达,抑制TNFAIP3蛋白的表达。5.在稳定过表达mi R-127的PC9细胞系中,与对照组相比,TNFAIP3的表达明显下调,在稳定敲减mi R-127的A549细胞系中,与对照组相比,TNFAIP3的表达明显上调,双荧光素酶报告基因实验显示mi R-127可直接靶向抑制TNFAIP3的3’-UTR序列。6.PC9细胞过表达mi R-127后,与对照组相比经TNF-α作用后NF-κB信号通路中IKKα/β、IκBα及p65的磷酸化水平明显上调,RIP1的K63泛素化水平增强;而A549细胞抑制mi R-127表达后,与对照组相比经TNF-α作用后IKKα/β、IκBα及p65的磷酸化水平明显下降,RIP1的K63泛素化水平减弱。在mi R-127过表达的PC9细胞中转染TNFAIP3真核表达载体后,mi R-127所引起的NF-κB信号通路的变化有所回复。7.在mi R-127过表达的PC9细胞中转染TNFAIP3真核表达载体,可抑制细胞的EMT、转移和侵袭能力;mi R-127过表达的PC9细胞中转染TNFAIP3真核表达载体,在Gefitinib诱导下,mi R-127对肿瘤细胞的抑制凋亡作用得到抑制,AKT与ERK的磷酸化水平有所回复。结论:1.肺癌组织中miR-127呈现显著高表达。2.mi R-127促进肺癌细胞的侵袭、转移、生长及上皮-间质转化(EMT)。3.mi R-127可降低肺癌细胞对于Gefitinib诱导的细胞凋亡的敏感性。4.mi R-127通过直接靶向作用于TNFAIP3 3’-UTR而抑制TNFAIP3的表达,并通过抑制TNFAIP3而活化NF-κB信号通路。5.miR-127对于肺癌细胞的侵袭、转移、生长及上皮-间质转化作用依赖于miR-127对于TNFAIP3的直接靶向抑制机制而实现。
[Abstract]:Objective : To investigate the role of mi R - 127 in lung cancer , and to investigate the expression of mi R - 127 in human lung cancer . Compared with the control group , the expression of IKK伪 / 尾 , I魏B 伪 and P 1 . The expression of miR - 127 is significantly higher in lung cancer tissues . 2.mi R - 127 promotes the invasion , metastasis , growth and epithelial - mesenchymal transition ( EMT ) of lung cancer cells .

【学位授予单位】：杭州师范大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：R734.2

【共引文献】