FBXO31介导Snaill泛素化降解抑制胃癌上皮-间质转化的研究

发布时间：2018-04-23 16:47

本文选题：FBXO31 + Snaill　；参考：《山东大学》2017年硕士论文

【摘要】：研究背景:胃癌(GC)是世界常见的恶性肿瘤之一,在癌症相关死亡中位居第三位,我国是胃癌高发区。胃癌患者生存期短、易复发,肿瘤的侵袭转移是造成胃癌预后差的重要原因。目前认为上皮-间质细胞转化(EMT)在肿瘤的侵袭转移过程中发挥重要作用,过程中有多种转录因子(EMT-TFs)的参与,这些EMT-TFs是高度不稳定的蛋白,易被蛋白酶体途径泛素化降解。FBXO31 是 F-box 蛋白家族成员,参与 Skp1-Cullin-F-box(SCF)泛素 E3连接酶复合物的形成,能够介导泛素依赖性蛋白酶体降解途径和调节信号转导。我们前期研究发现在胃癌组织中FBXO31的mRNA和蛋白水平明显降低,且低表达与胃癌患者预后差、存活期限短等密切相关。进一步的研究发现,FBX031高表达能够显著抑制人胃癌细胞的转移侵袭能力,但具体的机制有待进一步研究。研究目的:1.探究FBXO31对胃癌细胞侵袭转移能力的调控机制;2.探讨FBXO31能否通过泛素化依赖性途径降解EMT-TFs,并确定FBXO31与EMT-TFs间相互作用的关键结构域及分子机制。实验方法:1.分子及细胞水平的研究1.1人胃癌细胞转染FBXO31 siRNA,观察细胞表型变化。然后,将FBXO31 siRNA及高表达质粒分别转染胃癌细胞,细胞划痕和Transwell实验检测FBXO31干扰和高表达对胃癌细胞侵袭转移能力的影响。1.2 FBXO31 siRNA和高表达质粒分别转染人胃癌细胞,qRT-PCR和Western blot检测细胞中不同EMT-TFs在mRNA和蛋白水平的变化。1.3将FBXO1表达载体Myc-FBXO31及F-box结构域缺失的载体Myc-△FBXO31分别与EMT-TF Snail1的表达载体Flag-Snail1共转染胃癌细胞,Western blot和Co-IP检测FBXO31与Snail1的相互作用,并通过泛素化实验检测FBX031能否引起Snail1的泛素化降解。1.4 Myc-FBXO31高表达载体分别与Flag-Snail1的野生型和磷酸化位点突变的载体共转染胃癌细胞,Co-IP检测Snail1的降解是否需要发生磷酸化。2.动物水平的研究构建筛选FBXO31高表达的稳转细胞系(BGC-FBXO31),对裸鼠尾静脉注射,6周后观察并分析裸鼠体内肺转移的情况。3.临床标本的研究收集77例人胃癌及对应癌旁组织,Western blot检测组织中FBXO31与Snail1的表达并分析二者的相关性。实验结果:1.分子及细胞水平1.1胃癌细胞FBXO31干扰后细胞呈现长梭形,细胞间粘着性降低。细胞划痕和Transwell实验结果表明,FBXO31沉默能促进胃癌细胞侵袭转移,FBX031高表达能抑制胃癌细胞侵袭转移。1.2 FBXO31 siRNA和高表达质粒转染胃癌细胞,EMT-TF Snail1在mRNA水平没有变化,在蛋白水平可被FBX031下调。1.3 Co-IP结果显示FBXO31能与Snail1相互结合,且F-box结构域对于二者的相互作用是必需的,体内泛素化实验结果表明FBXO31能引起Snail1的泛素化,进一步研究发现FBXO31与Snail1的相互作用依赖于Snail1的磷酸化。2.动物水平的研究动物实验表明高表达的FBX031能显著抑制裸鼠体内胃癌细胞的侵袭转移。3.临床标本的研究Western blot结果显示:与癌旁组织相比,胃癌组织中FBXO31显著低表达,而Snail1显著高表达,二者在胃癌组织中的表达呈显著负相关。实验结论:研究结果表明,FBXO31能够泛素化降解EMT相关转录因子Snail1,进而抑制胃癌细胞的侵袭转移能力。在二者的相互作用中,FBXO31的F-box结构域和Snail1的GSK-3β磷酸化基序是不可或缺的。该研究阐明了 FBXO31抑制胃癌进展的分子机制,并确定了 EMT转录因子Snail1作为FBXO31调节胃癌侵袭转移的新靶点,为以FBXO31途径为靶点的抗肿瘤治疗提供理论依据。
[Abstract]:Objective : To investigate the effect of FBXO31 on the invasion and metastasis of gastric cancer cells . The results showed that FBXO31 could significantly inhibit the invasion and metastasis of gastric cancer cells . The results showed that FBXO31 could significantly inhibit the invasion and metastasis of gastric cancer cells in nude mice . The results showed that FBXO31 could significantly inhibit the invasion and metastasis of gastric cancer cells in nude mice .

【学位授予单位】：山东大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2017
【分类号】：R735.2

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