GM-CSF及其受体在食管癌中的表达及作用研究

发布时间：2018-04-25 04:33

  本文选题：粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子 + 食管癌　； 参考：《山东大学》2017年硕士论文

【摘要】：[研究目的]粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子(granolocyte-macrophage-colony stimulating factor,GM-CSF)是血液系统最常见的生长因子之一,其与特异性受(GM-CSFR)体结合后可促进血细胞的分化和成熟、促进机体免疫功能的发挥。研究表明,GM-CSF在多种恶性肿瘤如头颈部肿瘤、乳腺癌、肺癌、结直肠癌、前列腺癌中表达上调,并可通过免疫依赖和非免疫依赖两种途径调控肿瘤生长和进展,但其在食管癌中的研究较少。据此,本研究拟从蛋白和组织水平探究GM-CSF及其受体在食管癌中的表达情况,并从基础实验和临床回顾性分析水平明确GM-CSF在食管癌中的作用。[研究方法]1.GM-CSF及其受体在食管癌中的表达水平检测1.1通过蛋白质印迹(WB)检测食管癌Eca109细胞和9706细胞GM-CSF及其受体表达水平;1.2采用免疫组织化学试验(IHC)检测食管癌病理标本中GM-CSF及其受体表达水平,根据染色强度和染色面积进行评分,依次将其分级为阴性、低表达和高表达;2.GM-CSF在食管癌中的作用研究2.1外源性GM-CSF刺激对食管癌Eca109细胞生物学行为的影响2.1.1应用Cell Counting Kit-8(CCK-8)实验,比较GM-CSF刺激组和对照组Eca109细胞在24h、48h、72h和96h的增殖能力差异;2.1.2采用流式细胞术,探究GM-CSF刺激组和对照组Eca109细胞凋亡能力的差异;2.1.3通过计数细胞穿过Transwell小室基膜的数量评估GM-CSF刺激组和对照组Eca109细胞迁移和侵袭能力的不同;2.2 GM-CSF在放疗中变化水平对治疗效果的预测作用2.2.1应用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测食管癌患者在放疗过程中血清GM-CSF水平的变化,Log-Rank检验分析其与预后的关系;2.2.2应用Cox比例风险模型分析GM-CSF变化是否为独立预后因素。[实验结果]1.GM-CSF及其受体在食管癌中的表达水平1.1通过WB检测发现GM-CSF在Eca109细胞和9706细胞中均有一定程度表达,GM-CSFR在Eca109细胞中表达阳性,9706细胞中表达较低(p0.05);1.2本研究共分析93例食管癌患者病理标本,其中GM-CSF阳性率为100%,41例为高表达,52例为低表达,GM-CSFR阳性率为55.9%,其中45例为高表达,7例为低表达,41例为阴性;2.GM-CSF的抗肿瘤作用研究2.1外源性GM-CSF刺激对食管癌Eca109细胞生物学行为的影响2.1.1 Eca109 细胞在 GM-CSF 刺激后 72h(p=0.001)和 96h(p=0.003)增殖能力较对照组明显降低,但在24h和48h两组细胞的增殖能未见显著差异(p0.05);2.1.2 Eca109细胞在加入GM-CSF的无血清培养基中培养48小时后,凋亡细胞数较对照组无明显变化(p0.05),提示GM-CSF对凋亡可能无影响;2.1.3 Eca109细胞在GM-CSF刺激后穿过Transwell小室基膜的数量较对照组明显下降(p0.05),证明其可显著抑制细胞的迁移和侵袭能力;2.2血清GM-CSF在放疗中变化趋势对治疗效果的预测2.2.1研究共分析54例食管癌患者,23例在治疗过程中血清GM-CSF水平上升,31例下降,上升组总生存期(p=0.002)和无进展生存期(p=0.001)均明显高于下降组;2.2.2 GM-CSF 变化为独立预后因素(p=0.001,HR:0.244,95%CI:0.106-0.564),且预后效应强于疾病分期(p=0.001,HR:0.275,95%CI:0.127-0.596)。[结论]GM-CSF及其受体在食管癌中有一定表达水平。外源性应用GM-CSF可显著抑制食管癌细胞的增殖、迁移、侵袭能力,但对凋亡无明显影响。另外,放疗过程中GM-CSF水平上升是食管癌预后好的预测因素。因此,GM-CSF在食管癌中表现出抗肿瘤作用,对其作用机制进行深层次探究可能对食管癌治疗有重要意义。
[Abstract]:The expression of GM - CSF and its receptor in esophageal carcinoma were investigated by Western blot ( WB ) . The positive rate of GM - CSF in Eca109 cells was significantly lower than that in the control group ( p = 0.001 , HR : 0.244 , 95 % CI : 0.106 - 0.564 ) .

【学位授予单位】：山东大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2017
【分类号】：R735.1

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