跨膜丝氨酸蛋白酶4诱导肝细胞癌血管生成的机制作用研究

发布时间：2018-04-26 02:35

  本文选题：跨膜 + 氨酸　； 参考：《山东大学》2017年硕士论文

【摘要】：目的:肝细胞癌(Hepatocellular Carcinoma,HCC)是我国以及亚洲最常见的恶性肿瘤之一,其发生率与死亡率均居前列。肝癌侵袭、转移的分子机制研究,对肝癌的临床早期诊断、治疗、降低术后复发及转移以改善肝癌患者预后具有重要的现实意义。研究表明,血管生成的程度与肿瘤的分期密切相关,抑制肿瘤血管生成在一定程度上可抑制肿瘤的进展。跨膜丝氨酸蛋白酶4(transmembrane serine protease 4,TMPRSS4)是 Ⅱ 型跨膜丝氨酸蛋白酶(type II transmembrane serine protease,TTSPs)家族中的重要一员,具有较为典型的丝氨酸蛋白酶的结构特征,研究已证实其可促进肝细胞癌的复发及转移。前期研究表明,TMPRSS4可通过诱导肝癌上皮-间充质转化促进肝癌侵袭、转移,但其对肝癌血管生成的影响及相关机制目前尚不清楚。本研究拟在前期研究的基础上,进一步探索TMPRSS4诱导肝细胞癌的血管生成的作用及其机制,为防治肝细胞癌提供新的治疗靶点与理论支持。方法:(1)采用人肝癌细胞株MHCC97H与HuH-7细胞系进行实验:本实验采用肝癌细胞株MHCC97H与HuH-7细胞系。首先转染TMPRSS4过表达的慢病毒,以构建TMPRSS4上调的肝癌细胞株。根据实验需要,我们将细胞分为:肝癌细胞的对照(control)组、空白载体转染(Lv-GFP)组和 TMPRSS4 过表达(Lv-TMPRSS4)组。稳转细胞株建立后,将两种细胞株的control组、Lv-TMPRSS4肝癌细胞接种于裸鼠皮下成瘤。(2)观察指标及方法:体外培养上述肝癌细胞株,Matrigel胶成管实验检测不同TMPRSS4表达肝癌细胞株培养48h的细胞上清液对人脐静脉内皮细胞株(EA.hy926细胞)成管能力的影响;对皮下种瘤的肿瘤组织进行CD34染色以判断体内条件下TMPRSS4作用于血管生成的能力;PCR检测不同TMPRSS4表达的肝癌细胞株的血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)的表达量,Western Blot检测哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mammalian target of rapamycin,mTOR)以及磷酸化mTOR的表达量。结果:(1)TMPRSS4过表达细胞的构建TMPRSS4过表达慢病毒载体、空白载体转染人肝癌细胞株MHCC97H、HuH-7细胞株48h后,在荧光显微镜下可见转染空白载体的(Lv-GFP)及TMPRSS4过表达慢病毒载体(Lv-TMPRSS4)的肝癌细胞均带有绿色荧光,未转染慢病毒载体的对照组细胞在荧光显微镜下未见绿色荧光。qRT-PCR、Western Blot结果显示慢病毒载体转染48h后,转染TMPRSS4过表达载体的肝癌细胞TMPRSS4的表达水平显著增高。说明人肝癌TMPRSS4过表达细胞株构建成功。(2)TMPRSS4促进内皮细胞血管拟态形成Matrigel胶成管实验显示,加入TMPRSS4过表达肝癌细胞细胞上清培养液后,人脐静脉细胞在基质胶中的成管能力显著高于对照组及空白载体组。这表明TMPRSS4分泌了促肿瘤血管生成因子,从而促进了脐静脉内皮细胞在基质胶中的血管拟态形成。(3)体内实验证实TMPRSS4可诱导肝癌血管生成免疫组化结果显示,TMPRSS4过表达的HuH-7细胞所形成的肿瘤组织中TMPRSS4表达显著增强。CD34结果显示TMPRSS4过表达组肿瘤组织的微血管密度(microvesseldenisity,MVD)显著高于对照组。这说明在体内条件下,TMPRSS4可促进肝细胞癌微血管形成。(4)TMPRSS4可促进肝癌细胞分泌VEGFqRT-PCR结果显示:Lv-TMPRSS4过表达组的VEGF表达量显著高于对照组及转染空白载体组。(5)TMPRSS4可促进肝癌细胞内的p-mTOR表达Western Blot结果显示,Lv-TMPRSS4过表达组的p-mTOR表达量显著高于对照组及转染空白载体组,总mTOR表达量无显著改变。结论:(1)跨膜丝氨酸蛋白酶4可在体内、体外条件下促进肝细胞癌的血管生成。(2)TMPRSS4可显著上调血管内皮生长因子(VEGF)的表达。(3)TMPRSS4可以激活哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mTOR),使磷酸化的(p-mTOR)表达量显著上调。
[Abstract]:Objective : hepatocellular carcinoma ( HCC ) is one of the most common malignant tumors in China , and its occurrence rate and mortality rate are all in the forefront . The results were as follows : ( 1 ) The expression of MHCC97H and MHCC97H was significantly higher than that of control group . Conclusion : ( 1 ) Transmembrane serine proteinase 4 can increase the expression of vascular endothelial growth factor ( VEGF ) in vivo and in vitro .

【学位授予单位】：山东大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2017
【分类号】：R735.7

【相似文献】

相关期刊论文 前10条

1 徐卫东,张春平,王桂荣;肝细胞癌的变化模式[J];国外医学(内科学分册);2000年10期

2 ;早期发现肝细胞癌可增加治疗机会[J];河南医学研究;2000年02期

3 Schafer DF,潘朝法,李苏云;肝细胞癌[J];第四军医大学吉林军医学院学报;2000年01期

4 中沼安二,林淑兰,姚桢;有关小肝细胞癌病理学的最新认识[J];日本医学介绍;2000年05期

5 静雨;;美国肝细胞癌发病率增高[J];国外医学情报;2000年01期

6 张玉勋;;肝细胞癌的非手术治疗[J];国外医学情报;2000年05期

7 徐宏勇,李开宗,付由池,窦科峰,李景梦,何扬举;bcl-x,bax基因表达与肝细胞癌临床病理特征的关系[J];第四军医大学学报;2001年14期

8 蔡端;多中心源肝细胞癌的特征:与肝内转移的比较[J];国外医学.外科学分册;2002年02期

9 张春平;与白介素-18水平升高有关的肝细胞癌自发性消退[J];国外医学(内科学分册);2003年03期

10 薛海鸥,岳莉;儿童肝细胞癌1例报告[J];锦州医学院学报;2003年04期

相关会议论文 前10条

1 卞读军;;肝细胞癌经导管动脉化疗栓塞前后磁共振波谱研究[A];2009中华医学会影像技术分会第十七次全国学术大会论文集[C];2009年

2 贾建伟;赵洁;;肝细胞癌领域研究现状与进展[A];中医药防治感染病之研究（九）——第九次全国中医药防治感染病学术交流大会论文集[C];2009年

3 陈孝平;;肝细胞癌外科治疗进展[A];湖北省第21届肿瘤学术大会论文汇编[C];2011年

4 张杰;刘军建;韩云;张宁;芮静安;金城;周柔丽;;用荧光差异显示法筛选肝细胞癌相关新基因[A];2000全国肿瘤学术大会论文集[C];2000年

5 冯仕庭;李子平;谭国胜;孙灿辉;彭振鹏;;中晚期肝细胞癌的多层螺旋CT血管造影表现及临床应用[A];中华医学会第十三届全国放射学大会论文汇编（下册）[C];2006年

6 张法标;方哲平;王义;董辉;丛文铭;;上皮钙粘素和β-连接素在儿童肝细胞癌中的表达及其临床意义[A];2007年浙江省外科学学术会议论文汇编[C];2007年

7 陈钟杰;;螺旋CT诊断原发型肝细胞癌28例[A];2008年浙江省放射学年会论文汇编[C];2008年

8 贾克东;;肝细胞癌的诊断进展及治疗现状[A];全国中西医结合肝病新进展讲习班、江西省第二次中西医结合肝病学术会议资料汇编[C];2010年

9 李秋萍;龙顺钦;杨小兵;邓宏;蔡姣芝;潘宗奇;河文峰;周宇姝;欧阳育树;廖桂雅;吴万垠;;癌服灵治疗晚期肝细胞癌的临床研究[A];2012·中国医师协会中西医结合医师大会第三次会议论文集[C];2012年

10 朱明华;祝峙;刘晓红;林静;曲建慧;陈颖;曹晓哲;王力;倪灿荣;;乙型肝炎病毒感染与肝细胞癌发生关系的分子病理学研究[A];中华医学会病理学分会2009年学术年会论文汇编[C];2009年

相关重要报纸文章 前10条

1 中国抗癌协会临床肿瘤学协作专业委员会主任委员 秦叔逵;治疗肝细胞癌 别只盯着靶向药[N];健康报;2013年

2 记者 王丹 管九苹;肝细胞癌标志物研究获新进展[N];健康报;2013年

3 吴一福;四军医大唐都医院发现硒蛋白P与肝细胞癌发生有关[N];中国医药报;2007年

4 黎彬;肝癌研究重要进展——预测肝癌转移成为可能[N];中国医药报;2004年

5 钱文彩;α2δ1阳性细胞为新的肝细胞癌干细胞[N];中国医药报;2013年

6 新美;基础研究进展推动肝脏病学进步[N];中国医药报;2008年

7 周金莲;MIB-1和bcl-2表达预测肝癌发生[N];中国医药报;2004年

8 张金山;要灵活运用影像学提供的方法和手段[N];中国高新技术产业导报;2001年

9 李杰;不能手术切除肝细胞癌的治疗[N];科技日报;2006年

10 ;修复肝细胞 改善肝功能[N];人民日报海外版;2006年

相关博士学位论文 前10条

1 白兰;乙肝病毒捕获细胞因子和信号级联以逃避宿主免疫并维持持续感染[D];武汉大学;2014年

2 何洪卫;肝细胞癌内γδT细胞浸润减少及功能缺陷的机制研究[D];复旦大学;2014年

3 蔡晓燕;淋巴细胞在肝细胞癌和癌旁组织中的差异性表达研究[D];复旦大学;2014年

4 向导;细胞周期因子FoxM1促进肝脏再殖的研究[D];第二军医大学;2015年

5 康富标;共刺激分子B7-H3在肝细胞癌的表达及相关机制研究[D];中国人民解放军医学院;2015年

6 杨纯;Gankyrin正反馈调控Nrf2在肝细胞癌中发挥抗氧化作用[D];第二军医大学;2015年

7 高霞;PNPLA3基因单核苷酸多态性及基因表达与乙肝病毒感染易感性及乙肝相关肝细胞癌的关联性研究[D];河北医科大学;2016年

8 彭晨星;microRNA结合位点单核苷酸多态性对肝细胞癌预后影响的相关性研究[D];河北医科大学;2016年

9 田伟;γδT细胞免疫治疗肝细胞癌的实验研究[D];山西医科大学;2016年

10 叶甲舟;RBM8A与肝细胞癌的相关性及对肝细胞癌增殖及凋亡生物学特性的影响[D];广西医科大学;2016年

相关硕士学位论文 前10条

1 王飞;CDH17调控肝细胞癌的生物学机制的研究[D];福建医科大学;2015年

2 陈中博;咖啡摄入与肝细胞癌发病风险的Meta分析[D];河北医科大学;2015年

3 张华鹏;核受体辅激活蛋白5在肝细胞癌组织中的表达及其临床意义[D];郑州大学;2015年

4 郭慧敏;血清sCD25测定在肝细胞癌诊断中的意义[D];郑州大学;2015年

5 凌青霞;双氧化酶1（Duox1）在肝细胞癌中的表达调控及作用研究[D];复旦大学;2014年

6 李会芬;血清Talin-1在肝细胞癌诊断中的作用[D];郑州大学;2015年

7 蒙锦莹;血管生长相关因子的血清浓度与肝细胞癌预后的相关性研究[D];兰州大学;2015年

8 战勇;肝细胞癌术前造影参数与生物学表现相关性及术后复发相关因素讨论[D];中国人民解放军医学院;2015年

9 姚乐;microRNA-32在肝细胞癌中的表达及其临床预后意义[D];河北医科大学;2015年

10 吴华;MACC1在肝细胞癌中的表达与临床意义[D];安徽医科大学;2015年

，

本文编号：1804119