肺腺癌患者外周血单个核细胞集落培养的实验研究

发布时间：2018-05-02 19:50

本文选题：肿瘤干细胞 + 循环肿瘤细胞　；参考：《广西医科大学》2017年硕士论文

【摘要】：背景:肿瘤干细胞(tumor stem cells,TSC)学说提示肿瘤组织中存在极少部分肿瘤干细胞,其主要特点是自我更新、无限增殖的潜能和强致瘤性,肿瘤干细胞与肿瘤的发生、耐药、复发及转移的恶性生物学行为密切相关。肺癌是目前中国发病率最高的恶性肿瘤,其中肺腺癌占肺癌总数的30%-40%,是肺癌最常见的组织类型之一。有研究者发现肺腺癌起源于气道干细胞,气道干细胞属于气道末段细支气管肺泡导管连接处的细支气管肺泡干细胞,肺腺癌被认为是一种干细胞疾病,研究者认为靶向杀灭肺癌干细胞才可能是根治肺癌的有效治疗手段。尤其是近10余年的研究发现,肿瘤干细胞可以扮演转移灶的“种子”细胞角色,研究者认为“转移肿瘤细胞=肿瘤干细胞”。目前从血液循环中检测出肿瘤细胞已经是被认可的临床技术,并且可从中分离培养出肿瘤干细胞。虽然该技术可检测与分离出循环肿瘤细胞(circulating tumor cells,CTCs),但费用昂贵,这限制了其在科研和临床的应用与推广,目前尚缺乏简单便宜的分离培养方法,而且也缺乏后续干细胞扩增培养的技术。由于肺腺癌的肿瘤干细胞起源于正常组织的干细胞,两者生物学特性有许多相似之处,因此,本研究尝试采用人造血干细胞甲基纤维素半固体培养基对肺腺癌患者外周血单个核细胞进行集落培养,并尝试进行集落细胞的体外培养,为明确肿瘤干细胞特点提供前期实验基础。目的:本研究采用人造血干细胞甲基纤维素半固体培养基营造干细胞集落生长环境,对肺腺癌患者外周血单个核细胞进行集落培养及采用DMEM培养基对集落细胞进行体外培养,以求达到以下目的:(1)探索肺腺癌患者外周血非造血干细胞存在的可能性;(2)探索采用人造血干细胞甲基纤维素培养基培养出非造血干细胞集落的可能性及集落培养的情况;(3)探索采用dmem液体培养基对肺腺癌患者外周血非造血干细胞集落细胞的体外培养情况。方法:选取肺腺癌患者10例,患者病情的临床tnm分期为t2n1m1a-t4n3m1c。对各例患者均抽取外周血10ml,利用ficoll-paquetmplus分离出外周血单个核细胞,用甲基纤维素半固体培养基(含重组人干细胞因子等适合干细胞的生长因子)对其进行培养,动态观察细胞、集落的生长情况,描述集落生长形态和生长曲线,辨析出非造血干细胞克隆类型,并挑选非造血干细胞集落进行流式细胞术检测,检测指标为cd34与cd44,挑取非造血干细胞集落,机械分离后,在体外完全培养基条件下进行细胞传代培养,并观察其体外培养情况。结果:本研究共进行10例肺腺癌患者外周血单个核细胞集落培养研究,每一份培养物加入细胞量为(2.2±0.149)×105个细胞,经过2周左右培养,每一份培养物的细胞集落平均为120.70±27.893个,细胞集落生长曲线显示:在培养第5-7天细胞开始聚集成团状,第8-10天小型、初步细胞集落形成,第14-16天细胞集落形成,集落类型主要为bfu-e样、cfu-g样和cfu-gemm样集落,其中,bfu-e样与cfu-gemm样集落周边出现“铺路石”状细胞集落,呈密集片状,细胞间界限不清,挑取该细胞集落进行流式细胞术cd34与cd44双标检测,发现该细胞群体是cd34lowcd44high特点的细胞群体。进一步挑取上述不同类型集落进行体外完全培养基的培养,并连续8周观察,均未发现贴壁细胞的生成与增殖。结论:(1)在肺腺癌患者外周血单个核细胞中,非造血干细胞存在的可能性是有的;(2)采用人造血干细胞甲基纤维素培养基培养出非造血干细胞集落的可能性非常大,可能是源于“循环肿瘤细胞”;(3)很可能存在的非造血干细胞的体外培养需要进一步在培养基成分调整、实验技术提高的情况下进行。
[Abstract]:Background : The tumor stem cells ( CTCs ) are the most common malignant tumor in China . The colony formation and proliferation of non - hematopoietic stem cells in peripheral blood mononuclear cells of 10 patients with adenocarcinoma of lung were studied .

【学位授予单位】：广西医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2017
【分类号】：R734.2

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