青蒿琥酯联合卡铂对非小细胞肺癌A549细胞增殖、凋亡及细胞周期的作用

发布时间：2018-05-04 14:58

本文选题：青蒿琥酯 + 卡铂　；参考：《西南医科大学》2017年硕士论文

【摘要】：目的:晚期非小细胞肺癌的标准一线治疗方案中,以铂类为主或联合铂类的方案仍占较高比例,但与其他化疗药物联用时,极易引发严重的不良反应,包括肾毒性,胃肠道反应,耳毒性及血液系统毒性等。本研究以卡铂联合吉西他滨作为参照,通过多种体外实验,研究青蒿琥酯单药联合铂类化疗药物卡铂对非小细胞肺癌细胞A549细胞增殖、凋亡及细胞周期的作用,旨在探讨青蒿琥酯联合卡铂应用于非小细胞肺癌治疗的可行性,为寻找新的临床治疗非小细胞肺癌化疗方案提供科学的实验依据。方法:1.应用MTT法初步测定青蒿琥酯(Artesunate,ART),卡铂(Carboplatin,CBP),吉西他滨(Gemcitabine,Gem)抑制A549细胞增殖的半数抑制浓度(half maximal inhibitory concentration,IC50)。2.选择低毒单药剂量(抑制率≤30%的单药浓度),作为联合用药实验浓度,应用MTT法测定青蒿琥酯联合卡铂,吉西他滨联合卡铂对A549细胞增殖的影响。继而评估联合用药组的作用类型,为后续实验选定药物分组((1)ART单药组,(2)CBP单药组,(3)Gem单药组,(4)ART+CBP联合用药组,(5)Gem+CBP联合用药组)。3.采用平板克隆形成实验观察三种低剂量单药及联合用药后对A549细胞克隆增殖能力的影响。4.应用流式细胞术检测上述各组药物对A549肺癌细胞凋亡和细胞周期的影响。5.采用Tunel法观察各组药物对A549细胞凋亡形态的改变。6.应用Western Blot技术检测上述选定药物分组对A549凋亡相关蛋白(Bax、Bcl-2、P53、Casepase-3)的表达水平的影响及ART单药组,CBP单药组,ART+CBP联合用药组对A549在G2/M期相关蛋白(Cyclin B1、P21、P34)的表达水平的影响。结果:1.青蒿琥酯抑制A549细胞体外增殖,且呈现一定的浓度依赖性,经SPSS22.0计算,IC50为22.3μg/ml。低剂量青蒿琥酯与卡铂联合应用,对A549的增殖抑制作用具有协同或相加效应。2.青蒿琥酯及卡铂单药对A549细胞克隆形成率较对照组分别降低了15.7%,29.3%,ART联合CBP对A549的克隆形成率则显著降低了40.8%。3.青蒿琥酯单药主要诱导细胞发生早期凋亡,与CBP联合作用后,与单药组相比,能诱导更多的细胞凋亡,且凋亡细胞主要处于凋亡早期。4.青蒿琥酯单药将A549细胞周期阻滞在G2/M期,卡铂单药阻滞在S期,两药联合作用时在G2/M期细胞比例较阴性对照组有明显增加。5.Tunel镜检结果可见:ART单药组及ART+CBP联合用药组与对照组细胞相比,可见明显凋亡细胞,形态见核固缩,边聚较为明显。6.Western Blot结果显示:与对照组相比,ART+CBP组中促凋亡蛋白Bax、P53、caspase-3的表达显著升高,凋亡抑制相关蛋白Bcl-2的表达明显降低;G2/M期相关周期抑制蛋白P53、P21表达明显升高,而促细胞周期蛋白Cyclin B1表达则明显下降。结论:青蒿琥酯单药对A549细胞增殖有显著的抑制作用,同时青蒿琥酯还能显著增强化疗药物卡铂对A549细胞增殖的抑制,具有化疗增敏作用。青蒿琥酯单药及联合卡铂对A549细胞增殖的抑制作用可能与诱导肿瘤细胞凋亡,上调细胞周期抑制蛋白P53和P21、下调Cyclin B1的表达,阻滞细胞周期进程于G2/M期相关。
[Abstract]:Objective : To study the effects of carboplatin and carboplatin on the proliferation , apoptosis and cell cycle of A549 cells by combination of carboplatin and carboplatin in the treatment of non - small cell lung cancer . Compared with control group , the expression of pro - apoptotic protein Bax , P53 and caspase - 3 in A549 cells was significantly higher than that of control group .

【学位授予单位】：西南医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2017
【分类号】：R734.2

【参考文献】