PARP抑制剂上调miR-664b-5p表达增加BRCA1突变三阴性乳腺癌对化疗的敏感性

发布时间：2018-05-04 20:49

  本文选题：三阴性乳腺癌 + miR-664b-5p　； 参考：《南方医科大学》2017年博士论文

【摘要】：背景:研究证据表明,在BRCA1突变的三阴乳腺癌患者中,在原有化疗方案基础上联合PARP抑制剂获得的临床效应优于未联合PARP抑制剂的原方案。许多关于基于铂类的化疗方案的临床试验已经证实铂类化合物对三阴性乳腺癌患者有重要临床作用,特别是那些含有BRCAl/2突变的。miRNA通过结合到mRNA 3'端非编码区转录后下调靶基因表达,并在许多重要的病理生理过程中发挥作用。据报道,miRNA的异常表达参与调节乳腺癌的化疗敏感性。但是潜在机制还没有完全阐明。方法:两株BRCA1突变的三阴性乳腺癌细胞系,经卡铂加吉西他滨联合或未联合PARP抑制剂奥拉帕尼处理后,用miRNA芯片筛选差异表达的miRNAs。经qRT-PCR验证后,选择miR-664b-5p进一步研究。体外研究,细胞经药物处理或转染后,通过MTT试验检测细胞生长,流式细胞术检测细胞周期和凋亡,划痕和transwell侵袭实验检测细胞迁移和侵袭能力,qRT-PCR、免疫印迹和免疫荧光检测CCNE2的表达。以荧光素酶基因报告实验评估miR-664b-5p对CCNE2的作用。体内肿瘤生长用小鼠异种移植物肿瘤模型进行评估,经空载的或miR-664b-5p过表达的慢病毒表达载体转染的HCC1937细胞在无菌条件下注射到六周大的雌性BALB/c裸鼠皮下形成肿瘤异种移植,并定期测量肿瘤体积。最后,在三阴性乳腺癌组织中,用免疫组化染色法测定细胞周期蛋白E2表达,荧光原位杂交测定miR-664b-5p表达,并分析他们之间的相关性。结果:我们发现,与对照组相比,在BRCA1突变的三阴性乳腺癌细胞MDA-MB-436和HCC1937中,卡铂加吉西他滨联合PARP抑制剂奥拉帕尼能够上调miR-664b-5p表达,而在非BRCA1突变的三阴性乳腺癌细胞MDA-MB-231中则不能。功能实验表明在BRCA1突变的三阴性乳腺癌细胞中,miR-664b-5p过表达抑制细胞增殖,阻断细胞周期G1期向S期转化,促进细胞凋亡,并抑制迁移和侵袭,而抑制miR-664b-5p则产生相反的效应。CCNE2被确认为miR-664b-5p的功能靶基因,miR-664b-5p过表达下调CCNE2蛋白和mRNA的表达。在BRCA1突变的三阴性乳腺癌细胞中,CCNE2敲除对细胞产生的效应与miR-664b-5p过表达类似。CCNE2敲除和miR-664b-5p过表达都显著增加BRCA1突变的三阴性乳腺癌细胞对卡铂加吉西他滨的化疗敏感性,而抑制miR-664b-5p削弱卡铂加吉西联合PARP抑制剂奥拉帕尼引起的生长抑制作用。此外,小鼠移植瘤模型研究表明,与对照组相比miR-664b-5p能够抑制体内肿瘤生长,且PCR和免疫组化结果显示miR-664b-5p过表达肿瘤异种移植物中CCNE2 mRNA和蛋白表达更低。在90例三阴性乳腺癌临床样本中,54例(60.0%)高表达细胞周期蛋白E2,40例(44.4%)高表达miR-664b-5p。mmiR-664b-5p表达与CCNE2表达呈负相关。结论:miR-664b-5p作为肿瘤抑制因子,通过靶向抑制CCNE2在PARP抑制剂增加化疗敏感性作用中发挥重要作用。这可能是PARP抑制剂增加BRCA1突变的三阴性乳腺癌对化疗的敏感性的机制之一。
[Abstract]:The expression of miR - 664b - 5p and the expression of miR - 664b - 5p in three - negative breast cancer cells , including BRCAl / 2 mutation , were assessed by immunohistochemistry staining .

【学位授予单位】：南方医科大学
【学位级别】：博士
【学位授予年份】：2017
【分类号】：R737.9

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本文编号：1844600