TET1对乳腺癌MCF-7细胞系生物学行为的影响

发布时间：2018-05-05 17:12

本文选题：乳腺癌 + TET1　；参考：《河北医科大学》2017年硕士论文

【摘要】：第一部分构建低表达TET1的MCF-7细胞株目的:乳腺癌近些年来的发病率逐年升高,其治疗形成了以手术、化疗、内分泌治疗、放疗、靶向治疗及生物治疗为主的综合治疗。然而,乳腺癌的致死率依旧高居女性恶性肿瘤死亡率的第三位。这其中,有超过90%的死亡是由于肿瘤的复发转移引起的。因此,探索肿瘤发生发展、浸润及转移机制一直是研究热点。有研究表明,10-11异位蛋白(ten-eleven translocation1,TET1)作为促DNA去甲基化过程中的重要蛋白,可以催化5-甲基胞嘧啶(5m C)转化为5-羟甲基胞嘧啶(5hm C),实现DNA去甲基化和基因表达的调控。因此,本研究以人乳腺癌MCF-7细胞株为模型,通过沉默TET1基因表达,研究TET1对MCF-7细胞生物学行为的影响,以期为肿瘤的临床诊治提供新的靶点。材料与方法:应用慢病毒转染方法,构建TET1低表达的稳转细胞株(MCF-7-si TET1)以及携带e GFP的阴性对照稳转细胞株(MCF-7-negative control,MCF-7-NC),运用SYBR Green法实时荧光定量PCR检测TET1在转录水平的表达,Western blot法检测TET1在蛋白水平的表达。结果:成功建立低表达TET1的MCF-7细胞模型(MCF-7-si TET1),用SYBR Green法实时定量PCR检测TET1的表达,结果示,在MCF-7-si TET1中,与MCF-7-NC组相比,MCF-7-si TET1细胞中TET1表达下降,差异有统计学意义(P0.001);Western blot法检测TET1表达,应用Image J扫描其灰度值,结果表明,与MCF-7-NC组相比,MCF-7-siTET1细胞中TET1表达下降,差异有统计学意义(P0.01)。结论:成功构建沉默TET1的MCF-7-si TET1稳转细胞株模型。第二部分TET1对乳腺癌MCF-7细胞系生物学行为的影响目的:10-11异位蛋白(ten-eleven translocation1,TET1)在DNA去甲基化过程中发挥重要作用,可通过催化5m C转化为5hm C实现DNA去甲基化和基因表达的调控。有研究指出,TET1基因的突变与多种实体瘤的发生、发展及浸润转移密切相关,但其作用机制有待进一步研究。因此,本研究探究TET1对MCF-7细胞增殖、迁移、侵袭等生物学行为的影响,并通过实验初步探究TET1影响的相关分子机制,以期为肿瘤的临床诊治提供新的思路。材料与方法:1倒置显微镜下观察转染细胞形态,以MCF7-NC作为阴性对照组,以MCF-7作为空白对照组,运用CCK-8法检测沉默TET1对MCF-7细胞增殖的影响,利用细胞划痕实验、TranswellTM检测TET1对细胞迁移、侵袭能力的作用,最后应用Western blot检测TET1与EMT相关蛋白(E-cadherin、N-cadherin、β-catenin、Vimentin)分子的表达。2应用SPSS13.0统计软件进行实验数据分析,两独立样本的比较应用成组t检验分析,多组间均数的比较应用单因素方差分析,多样本均数间的多重比较应用Tukey检验分析,数据运用mean±SD表示,每组实验不少于3个独立样本的重复,以P0.05为差异具有统计学意义。结果:1 CCK-8法检测细胞的增殖能力,MCF-7组与MCF-7-NC组相比,细胞增殖未见明显差异,而MCF-7-si TET1组细胞增殖能力相较前两组明显升高(P0.001)。平板克隆形成实验检测细胞增殖能力,MCF-7组与MCF-7-NC组相比,细胞增殖未见明显差异,而MCF-7-si RNA组细胞增殖能力高于MCF-7-NC组和MCF-7组(P0.0001)。2细胞划痕实验检测细胞的迁移能力,与MCF-7组及MCF-7-NC组相比,MCF-7-si TET1组细胞的迁移能力显著增强(P0.01)。3 TranswellTM小室检测细胞的侵袭能力,与MCF-7组和MCF-7-NC组相比,MCF-7-si TET1组细胞的侵袭能力显著上升(P0.0001)。4选用倒置显微镜观察细胞形态,MCF-7-NC组和MCF-7-si TET1组细胞形态无明显变化,进一步运用Western blot法检测EMT相关标志物:与MCF-7组和MCF-7-NC组细胞相比,MCF-7-si TET1组细胞的E-cadherin表达降低(P0.0001),N-cadherin表达升高(P0.0001)、Vimentin表达升高(P0.01),β-catenin表达升高(P0.01)。结论:TET1可以抑制MCF-7细胞的增殖、迁移、侵袭能力,其可能与通过Wnt/β-catenin通路抑制EMT的发生有关。
[Abstract]:The expression of TET1 in MCF - 7 - si TET1 cell line MCF - 7 - si TET1 was detected by SYBR Green method . The effects of TET1 on proliferation , migration and invasion of breast cancer MCF - 7 cells were investigated . Compared with MCF - 7 and MCF - 7 - NC groups , the expression of E - cadherin in MCF - 7 - si TET1 group increased significantly ( P0.01 ) .

【学位授予单位】：河北医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2017
【分类号】：R737.9

【参考文献】