人肝癌细胞系SMMC-7721中肝癌干细胞样细胞的初步探讨

发布时间：2018-05-06 09:00

  本文选题：肝癌干细胞样细胞 + 悬浮培养　； 参考：《河北医科大学》2015年硕士论文

【摘要】：目的:探索获取肝癌干细胞样细胞的方法并观察其生物学特性及肿瘤干细胞表面标志物表达情况。方法:1收集采用普通培养基贴壁培养与采用无血清培养基悬浮培养的人肝癌细胞株SMMC-7721细胞。2在倒置显微镜下观察两种培养方法处理后的人肝癌细胞株SMMC-7721肿瘤细胞的形态学特征。3流式细胞仪检测两种培养方法处理后的人肝癌细胞株SMMC-7721肿瘤细胞中肿瘤干细胞表面标志CD90、CD133、CD24的各自表达量。4SYBR GreenⅠReal-Time PCR方法检测两种培养方法处理后的人肝癌细胞株SMMC-7721肿瘤细胞中肿瘤干细胞表面标志CD90、CD133、CD24对应的m RNA表达水平的变化情况。5将两种培养方法处理后的人肝癌细胞株SMMC-7721肿瘤细胞各自注射入不同的裸鼠皮下,观察并记录种植瘤的体积,依此比较两种培养方法处理后肿瘤细胞的致瘤能力及体内增殖能力。结果:1两种培养方法处理后肿瘤细胞形态学变化。倒置显微镜下观察到贴壁培养的SMMC-7721肿瘤细胞呈铺路石样生长,排列规整。而悬浮培养后SMMC-7721肿瘤细胞逐渐由单细胞聚集、增殖成球状或类球状。2应用流式细胞仪检测两种培养方法处理后肿瘤干细胞表面标志CD90、CD133、CD24的各自表达量比较。结果显示:悬浮培养组中CD90(571.77±8.70)、CD24(233.56±10.85)的表达量明显高于贴壁培养组(19.15±0.54、17.37±0.15),差异有统计学意义(CD90 t=-109.80 P=0.00;CD24 t=-34.51 P=0.00),但CD133在悬浮培养组(1.42±0.61)与贴壁培养组(1.48±1.09)中的表达量差异无统计学意义(t=0.08 P=0.94)。3两种培养方法处理后肿瘤干细胞表面标志CD90、CD133、CD24对应的m RNA表达水平的变化情况。3.1RNA的鉴定紫外线下观察可见有两条明亮的条带,分别对应于28S和18S RNA,另外有一条较暗淡的5S条带。28S和18S条带的光密度值之比约为(1.5~2):1,并且未见RNA弥散带,表明RNA完整性良好。3.2m RNA相对表达结果Real-Time PCR结果显示,CD90、CD24、CD133基因均有扩增,扩增曲线均进入平台期,熔解曲线呈标准的单峰,无杂峰出现,表明扩增产物特异。若贴壁培养组m RNA的表达量设定为1,则悬浮培养组的CD90、CD24、CD133m RNA相对表达量分别为1.72±0.19、1.72±0.19、1.05±0.03。两组相比,悬浮培养后细胞的肿瘤表面标志物CD90、CD24的m RNA相对表达量明显高于贴壁培养组,差异具有统计学意义(CD90t=-6.55 P=0.02,CD24 t=-6.71 P=0.00),而贴壁培养组的CD133m RNA表达量相比悬浮培养组的无明显差异(t=-3.41 P=0.08)。4比较两种培养方法处理后肿瘤细胞致瘤性及体内增殖能力。根据隔天测量皮下注射两种方法培养的SMMC-7721的裸鼠肿瘤长(a,单位mm)、宽(b,单位mm),按ab2/2计算出的体积(V,单位mm3)大小(贴壁培养组肿瘤细胞裸鼠皮下注射后2天:71.23±51.44,4天:60.08±24.33,6天:45.14±15.24,8天:32.56±10.16,10天:31.73±7.01,12天:26.41±13.95,14天:26.95±14.14;悬浮培养组肿瘤细胞裸鼠皮下注射后2天:60.17±47.93,4天:41.09±19.37,6天:32.90±14.13,8天:74.87±27.54,10天:97.30±37.63,12天:209.06±138.40,14天:294.69±250.65),统计学分析结果显示两组间差别有统计学意义(F=11.76,P=0.01),说明两组皮下肿瘤致瘤性及体内增殖能力有差别。而测量时间与培养方式之间存在交互作用(F=6.18,P=0.03),随着测量时间的延长,悬浮培养组所致的皮下肿瘤体积变化趋势呈从开始注射后2天到注射后6天为减小(2天:60.17±47.93,4天:41.09±19.37,6天:32.90±14.13),6天后大幅增高(8天:74.87±27.54,10天:97.30±37.63,12天:209.06±138.40,14天:294.69±250.65),贴壁培养组皮下肿瘤体积变化趋势则呈缓慢减小后趋于稳定的趋势(2天:71.23±51.44,4天:60.08±24.33,6天:45.14±15.24,8天:32.53±10.16,10天:31.73±7.01,12天:26.41±13.95,14天:26.95±14.14)。说明悬浮培养的肿瘤细胞在裸鼠体内的增值能力强于贴壁培养的。且贴壁培养组编号4的裸鼠在皮下注射肿瘤细胞14天内皮下肿瘤体积逐渐缩小至未触及,结果提示悬浮培养组比贴壁培养组致瘤性更强。结论:1悬浮培养后人肝癌细胞株SMMC-7721部分细胞获得了与肿瘤干细胞相似的部分特性,即为肝癌干细胞样细胞。2经过悬浮培养的人肝癌细胞株SMMC-7721肿瘤细胞中表达肝癌干细胞样细胞表面标志物CD90、CD24的量明显比贴壁培养的肿瘤细胞多,且所对应的m RNA相对表达量也是相应增高的。但CD133及其对应的m RNA表达效果在两种培养方法的肿瘤细胞中无明显差别。因此,悬浮培养后的人肝癌细胞株SMMC-7721肿瘤细胞中可能存在肝癌干细胞,但肝癌干细胞样细胞的特异性细胞表面标志物仍需进一步筛选及确定。3两种不同培养方法处理的人肝癌细胞株SMMC-7721肿瘤细胞对裸鼠的致瘤性及体内增殖能力有明显差异。悬浮培养法与贴壁培养法相比,处理后的肿瘤细胞致瘤性及体内增殖能力更强,再次说明悬浮培养后的人肝癌细胞株SMMC-7721肿瘤细胞中可能存在肝癌干细胞。但悬浮培养法是否可作为获取肝癌干细胞样细胞首选的研究方法仍需进一步讨论。
[Abstract]:Objective : To investigate the expression of CD90 , CD133 and CD24 in human liver cancer cell line 7721 . The expression of CD90 , CD133 and CD24 in human liver cancer cell line 7721 was detected by flow cytometry . The results showed that the expression of CD90 , CD133 and CD24 in human liver cancer cell lines after treatment was significantly higher than that in adherent culture group ( 19.15 卤 0.54 , 17.37 卤 0.15 ) . There was no significant difference between the two groups ( F = 11.76 , P = 0 . 03 ) . There was a significant difference between the two groups ( F = 11.76 , P = 0 . 03 ) . Conclusion : 1 . The expression of CD90 and CD24 in tumor cells of human liver cancer cells transfected by suspension culture is much higher than that of adherent culture .

【学位授予单位】：河北医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：R735.7

【相似文献】

相关期刊论文 前10条

1 张涛;李东;漆仲春;彭晶晶;陈滔;谭勇;周进军;许涛;付曾强;刘煜;李华;;肝癌Huh7干细胞样细胞的富集培养及鉴定[J];中国肿瘤生物治疗杂志;2013年06期

2 易善永;南克俊;陈静;姜丽丽;;吉西他滨联合YH-16对肝癌干细胞样细胞的影响[J];中国肿瘤生物治疗杂志;2010年05期

3 赵丽琴;郭伟剑;张晓伟;屈晓飞;王小凤;倪苏婕;黄明主;;CBX7在胃癌干细胞样细胞中的表达及其功能研究[J];中国癌症杂志;2013年02期

4 周蓓;肖立红;肖荞;任凯群;曹建国;;8-溴-7-甲氧基白杨素对Huh-7细胞系肝癌干细胞样细胞自我更新的影响[J];湖南师范大学学报(医学版);2013年01期

5 王欣荣;单保恩;艾军;刘丽华;刘月彩;张超;张海谱;刘登湘;;小鼠乳腺癌4T1细胞中肿瘤干细胞样细胞的富集和鉴定[J];中国肿瘤生物治疗杂志;2010年04期

6 吕新全;索振河;马长路;赵阿红;宋一民;李惠翔;;干细胞样细胞在乳腺良恶性病变中的数量与分布[J];临床与实验病理学杂志;2008年04期

7 张洪也;程勇;胡祥;吕原;武乃金;;LoVo细胞系中结肠癌干细胞样细胞的分离、培养及鉴定[J];中国肿瘤生物治疗杂志;2010年02期

8 朱小青;;胶质瘤干细胞样细胞的自我更新和致癌性与PI3K/mTOR及MEK/ERK信号通路的相互作用有关[J];中国病理生理杂志;2010年12期

9 张小丽;高建;贾茜;邓涛;;肝癌干细胞样细胞的分离及其耐药性受PI3K/Akt通路调节[J];第三军医大学学报;2013年02期

10 仇波;林毅;王勇;陶钧;王运杰;;Bcl-2在人脑胶质瘤干细胞样细胞中的表达及病理相关性[J];中华神经外科疾病研究杂志;2013年04期

相关会议论文 前4条

1 米彦军;符立梧;;Axitinib对肿瘤干细胞样细胞的作用及其机制研究[A];2011医学科学前沿论坛第十二届全国肿瘤药理与化疗学术会议论文集[C];2011年

2 焦洁;张松法;叶枫;吕卫国;程晓东;王新宇;谢幸;;CyclinD1参与卵巢癌干细胞样细胞上皮向间质转变的调控[A];2011年浙江省妇产科学学术年会暨“妇产科常见疾病的临床研究新进展”学习班论文汇编[C];2011年

3 刘冰洁;李小平;王建六;魏丽惠;;子宫内膜癌干细胞样细胞特性初步研究[A];中华医学会第十次全国妇产科学术会议妇科肿瘤会场（妇科肿瘤学组、妇科病理学组）论文汇编[C];2012年

4 赖东梅;刘特;黄勇;王丽华;程蔚蔚;;原代卵巢癌干细胞样细胞的分离、培养及鉴定[A];第四届长三角妇产科学术论坛暨浙江省2009年妇产科学术年会论文汇编[C];2009年

相关博士学位论文 前5条

1 杨栋;川芎嗪、丹参酮ⅡA对PG干细胞样细胞恶性生物学行为影响的研究[D];中国中医科学院;2015年

2 张烨;上皮间质转化与胰腺癌肿瘤干细胞样细胞的相关性研究[D];南京医科大学;2012年

3 沈明;负性共刺激分子B7-H1在A2B5阳性人脑胶质瘤干细胞样细胞中的负性调控作用探讨[D];复旦大学;2011年

4 王新宇;卵巢癌干细胞样细胞与耐紫杉醇细胞的差异表达蛋白谱特征及其临床意义[D];浙江大学;2014年

5 阮洁;化疗富集卵巢癌肿瘤干细胞样细胞及对相关干性基因表达影响的研究[D];北京协和医学院;2009年

相关硕士学位论文 前7条

1 曹恒;人肝癌细胞系SMMC-7721中肝癌干细胞样细胞的初步探讨[D];河北医科大学;2015年

2 胡慧;人绒癌干细胞样细胞的体内鉴定及其化疗耐药特性的初步研究[D];中南大学;2014年

3 燕丽;5Fu对乳腺癌细胞向肿瘤干细胞样细胞逆向分化的作用[D];郑州大学;2011年

4 赵清霞;肝癌、结肠癌干细胞样细胞新型培养体系及其细胞系建立的研究[D];浙江理工大学;2010年

5 徐铭竹;CXCR4在舌鳞癌组织及癌干细胞样细胞中的生物学表达与调控[D];广西医科大学;2010年

6 仇志坤;胶质瘤干细胞样细胞中MGMT表达以及与替莫唑胺耐药相关机制研究[D];广东药学院;2011年

7 张小丽;肝癌干细胞样细胞的分离及其耐药性受Akt通路调节[D];重庆医科大学;2013年

，

本文编号：1851661