sprouty1蛋白在肺腺癌中的功能及其作用机制的研究

发布时间：2018-05-08 13:27

  本文选题：非小细胞肺癌 + 肺腺癌　； 参考：《吉林大学》2017年博士论文

【摘要】：肺癌是一种致死性、恶性疾病,因其发病率逐年增加、预后差,是严重威胁人类的公共健康问题。虽然有大量针对肺癌的分子生物学实验,但我们对肺癌的发生、发展中的分子生物学机制仍不十分清楚。sprouty1是已知的RTK信号转导通路的抑制剂,可以通过调节EGF、FGF、PDGF等多种途径介导的信号转导通路影响细胞的增殖、分化、转移。鉴于国内外尚没有sprouty1在肺腺癌中的表达及其作用机制的相关报道,我们首先构建sprouty1基因敲除小鼠模型,利用免疫组织化学染色和免疫荧光染色的实验方法,验证sprouty1在肺组织中的表达情况,观察sprouty1基因敲除后对小鼠肺组织表型的影响、以及对Ⅱ型肺泡上皮细胞功能的影响。其次,通过HE染色、免疫组化染色的方法比较sprouty1基因敲除小鼠与野生型小鼠的肺癌发病率的差异,以及两种基因型小鼠肺组织中TTF1的表达情况。而且将在体外利用细胞转染技术构建sprouty1过表达的A549细胞系,验证sprouty1对肺癌细胞增殖、分化的影响。最后,利用免疫荧光染色、western-blot等方法进一步探讨sprouty1在肺腺癌发生、发展中的生物学功能,以及可能的作用机制,最终揭示sprouty1的抑癌作用本质。通过上述实验,我们得到以下结果:1、sprouty1在肺组织中高度表达,主要是由Ⅱ型肺泡上皮细胞(alveolar epithelial cell typeⅡ,AECⅡ)表达,sprouty1基因敲除后导致AECⅡ表达PCNA和Ki-67增加,说明sprouty1基因敲除后促进Ⅱ型肺泡上皮细胞的增殖。2、sprouty1基因敲除小鼠较野生型小鼠的肺癌发生率明显增加(P0.01),且肿瘤的病理学分型符合肺腺癌。3、体外过表达sprouty1是A549细胞的细胞周期相关蛋白表达减少,说明sprouty1可抑制肺腺癌细胞的增殖。4、sprouty1基因敲除后导致小鼠肺组织中EGFR、FGFR2和p ERK表达增加,且p ERK与PCNA存在共染色,说明sprouty是通过EGF、FGF介导的ERK信号转导通路调控细胞的增殖。5、sprouty1基因敲除后小鼠肺组织中vimentin、β1-integrin、SMA、PDGFRβ和fibronectin的蛋白表达增加,说明sprouty1可通过调控细胞的EMT抑制肺腺癌的侵袭。通过以上实验结果,我们认为sprouty1可被认为是一种肺腺癌的抑癌基因,主要通过抑制EGF、FGF介导的Ras/ERK信号转导通路和抑制腺癌细胞的EMT这两大机制,从而抑制肺腺癌细胞的增殖和侵袭。未来,sprouty1也许可以成为肺癌治疗的新靶点。
[Abstract]:Lung cancer is a fatal and malignant disease. Because of its increasing incidence and poor prognosis, lung cancer is a serious public health problem. Although there are a lot of molecular biological experiments aimed at lung cancer, we do not know that the molecular biological mechanism of lung cancer is very clear that .sprouty1 is an inhibitor of known RTK signal transduction pathway. It can affect the proliferation, differentiation and metastasis of cells by regulating the signal transduction pathway mediated by EGFG FGF- PDGF and other pathways. Since there are no reports on the expression and mechanism of sprouty1 in lung adenocarcinoma at home and abroad, we first constructed the sprouty1 gene knockout mouse model and used immunohistochemical staining and immunofluorescence staining methods. To verify the expression of sprouty1 in lung tissue and observe the effect of sprouty1 gene knockout on the phenotype of lung tissue and the function of type 鈪，

本文编号：1861588