Wdr5通过Wnt通路促进肝癌细胞增殖的研究

发布时间：2018-05-09 20:07

  本文选题：Wdr5 + 原发性肝癌　； 参考：《兰州大学》2016年硕士论文

【摘要】：目的:研究发现Wdr5在干细胞的分化、全能性维持以及肿瘤发生发展过程中发挥着重要作用,下调Wdr5可以抑制成骨细胞的增殖,而上调Wdr5可以促进膀胱癌细胞的增殖及自我更新能力。然而Wdr5对肝癌细胞增殖能力的影响未见报道。本研究拟通过构建Wdr5干扰模型,采用慢病毒转染的方法感染肝癌细胞后观察肝癌细胞增殖能力的变化来探讨其对肝癌细胞增殖能力的影响及其可能的机制,为原发性肝癌的诊断及临床治疗提供新的的思路及理论依据。方法:通过构建Wdr5的shRNA模型shWdr5 A和shWdr5 B,并通过慢病毒转染方法感染靶细胞(人肝癌细胞株Huh7和HepG2),用qPCR和Western blot方法检测干扰后Wdr5的表达水平验证感染效果。进而通过克隆形成实验和MTT法检测下调或沉默Wdr5表达之后对肝细胞增殖的影响,并用qPCR和Western blot检测Wnt通路中关键基因β-catenin表达水平的变化来探索Wdr5是否通过经典Wnt/β-catenin通路,并调节关键基因β-catenin的表达而影响肝癌细胞的增殖。结果:成功构建Wdr5的干扰模型后,通过慢病毒转染方法感染肝癌细胞株Huh7和HepG2,qPCR和Western blot实验结果显示干扰后Wdr5的表达水平较对照组明显下降。克隆形成实验和MTT法结果显示,当Wdr5表达被沉默或下调后,肝癌细胞株Huh7和HepG2的克隆形成和细胞增殖能力显著降低。进一步通过qPCR和Western blot法检测Wnt通路关键基因β-catenin表达水平,发现在Huh7细胞株中,Wdr5被干扰后,β-catenin的表达水平显著降低。结论:Wdr5对肝癌细胞的增殖具有重要调节作用,下调Wdr5能抑制肝癌细胞的增殖,而这一作用的重要机制可能是通过经典Wnt/β-catenin通路,并调节关键基因β-catenin的表达来实现的。
[Abstract]:Objective: Wdr5 plays an important role in stem cell differentiation, totipotent maintenance and tumorigenesis and progression. Down-regulation of Wdr5 can inhibit the proliferation of osteoblasts. Upregulation of Wdr5 could promote the proliferation and self-renewal of bladder cancer cells. However, the effect of Wdr5 on the proliferation of hepatoma cells has not been reported. The aim of this study was to investigate the effect of lentivirus transfection on the proliferation of hepatoma cells and its possible mechanism by constructing a Wdr5 interference model and observing the changes of the proliferation ability of hepatoma cells after infection with lentivirus. To provide a new way of thinking and theoretical basis for the diagnosis and clinical treatment of primary liver cancer. Methods: Wdr5 shRNA model shWdr5 A and shWdr5 B were constructed, and the target cells (Huh7 and HepG2) were infected by lentivirus transfection. The expression level of Wdr5 was detected by qPCR and Western blot methods. Then the effects of down-regulation or silencing of Wdr5 on the proliferation of hepatocytes were detected by clone formation assay and MTT assay. The changes of 尾 -catenin expression level in Wnt pathway were detected by qPCR and Western blot to explore whether Wdr5 passed through the classical Wnt/ 尾 -catenin pathway. The expression of 尾-catenin, a key gene, also affected the proliferation of hepatoma cells. Results: after successfully constructing the interference model of Wdr5, the expression level of Wdr5 was significantly decreased after lentivirus transfection of Huh7 and HepG2 qPCR and Western blot. The results of clone formation assay and MTT assay showed that when the expression of Wdr5 was silenced or down-regulated, the clone formation and proliferation of Huh7 and HepG2 were significantly decreased. Furthermore, the expression of 尾 -catenin, a key gene in Wnt pathway, was detected by qPCR and Western blot. It was found that the expression of 尾 -catenin was significantly decreased after the interference of Wdr5 in Huh7 cell line. Conclusion Wdr5 plays an important role in regulating the proliferation of HCC cells, and down-regulating Wdr5 can inhibit the proliferation of HCC cells. The important mechanism of this action may be through the classical Wnt/ 尾 -catenin pathway and the regulation of the expression of the key gene 尾 -catenin.
【学位授予单位】：兰州大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2016
【分类号】：R735.7

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