Cripto-1对肝癌侵袭转移的影响及机制研究

发布时间：2018-05-17 05:25

本文选题：肝细胞癌 + Cripto-1　；参考：《安徽医科大学》2015年硕士论文

【摘要】：[背景]肝癌是常见的消化系统肿瘤,低手术切除率和术后复发转移使其成为病死率最高的恶性肿瘤之一,所以对肝癌侵袭转移方面的研究成为当前肝癌研究的热点。Cripto-1基因是一种在胚胎干细胞中表达并对其维持自我更新能力至关重要的调控基因。最新研究发现Cripto-1的表达在多种肿瘤中重新出现,并调控肿瘤的增殖、侵袭、血管生成和EMT (epithelial-mesenchymal transition,内皮间质转化)等重要事件。因此,研究Cripto-1对肝癌侵袭转移的影响,对探索肝癌的恶性进展机制以及寻找肝癌治疗的新靶点具有重要意义。[目的] (1)分析Cripto-1蛋白和mRNA在不同转移潜能人肝癌细胞株、肝癌及癌旁组织中的表达水平,探讨Cripto-1与肝癌侵袭转移能力之间的关系。(2)检测肝癌组织中Cripto-1蛋白的表达,分析Cripto-1蛋白表达水平与肝癌临床病理特征的相关性,探讨Cripto-1在肝癌的恶性进展和侵袭转移过程中的作用。(3)检测Cripto-1过表达肝癌细胞株中EMT相关标志物和细胞运动能力的变化,探讨Cripto-1促进肝癌侵袭转移的分子机制。[方法] (1)通过Western Blot、qPCR (Real-time Quantitative PCR,实时定量PCR)方法,检测不同转移潜能人肝癌细胞株、肝癌及癌旁组织中Cripto-1的表达水平,分别从蛋白和mRNA水平比较其表达水平与肝癌侵袭转移间的关系。(2)通过免疫组织化学染色检测肝癌患者组织中Cripto-1蛋白的表达并探讨其表达与肝癌临床病理特征之间的关系。(3)通过重组慢病毒转染技术构建Cripto-1过表达的人肝癌Huh7细胞株,并通过Transwell迁移和侵袭实验检测Cripto-1过表达对Huh7细胞株的运动能力的影响。(4)通过qPCR、Westren Blot方法检测Cripto-1过表达对Huh7细胞株EMT标志物表达的影响。[结果] (1)与癌旁组织相比,肝癌组织中Cripto-1的蛋白和mRNA表达水平均明显升高。不同转移潜能的人肝癌细胞株中Cripto-1表达量存在明显差异。低转移潜能的人肝癌细胞株Cripto-1低表达,高转移潜能人肝癌细胞株Cripto-1高表达。(2)免疫组织化学染色结果显示：Cripto-1在肝癌组织中的表达主要定位于胞浆中,Cripto-1在肝癌组织中的高表达率为64.6%(53/82),明显高于正常肝组织中的0%(0/10)。Cripto-1在肝癌组织中的高表达与肿瘤分化程度、血管侵犯和转移状态有关(P0.05),而与患者性别、年龄、血清AFP水平、HBsAg状态、肝硬化及肿瘤的大小、数目、包膜情况和TNM分级等无明显相关性(P0.05)。(3) Transwell小室迁移侵袭实验结果显示：Cripto-1过表达Huh7细胞株穿过Transwell小室的细胞数目明显高于空白对照组和空载病毒转染组Huh7细胞株(p0.05)。(4) Cripto-1过表达Huh7细胞株与空载病毒转染组Huh7细胞株相比EMT标志物表达情况存在明显差异。Cripto-1过表达Huh7细胞株中上皮细胞标志物E-Cadherin表达量降低,而间质细胞标志物N-Cadherin和Vimentin表达量升高。[结论]Cripto-1在肝癌中高表达,并且其表达量与肝癌的侵袭转移能力呈正相关。Cripto-1过表达Huh7细胞株表现出EMT趋势,并且获得了更强的侵袭转移能力,Cripto-1可能通过促进肝癌的EMT进程使其获得更强的侵袭转移能力。
[Abstract]:Objective : To investigate the relationship between the expression level of Crispr - 1 protein and its expression level in hepatocellular carcinoma ( HCC ) , and to investigate the relationship between the expression level of Crispr - 1 and the invasion and metastasis of liver cancer . ( 2 ) The expression of Crispr - 1 in HCC tissues was significantly higher than that in normal liver tissues ( P 0.05 ) .
【学位授予单位】：安徽医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：R735.7

【参考文献】