肺癌胸水肿瘤细胞的体外培养、鉴定及其对常规化疗药物敏感性研究

发布时间：2021-03-02 10:15

背景肺癌是全球范围内威胁人类生存的一大健康问题。在我国,男性患者中肺癌发病率居于所有癌症的首位;女性患者中,仅次于乳腺癌居第2位[1]。同时,肺癌患者的死亡率居高不下,据世界卫生组织预测,截至到2030年,全球每年将会有约250万人死于肺癌。造成肺癌高死亡率的主要原因之一是一半以上的肺癌患者诊断时已是晚期(ⅢB期-Ⅳ期),此时,可供选择的治疗方案只有全身性化疗和有限的靶向治疗及免疫治疗[2]。然而,在全身化疗的情况下,肺癌患者的五年生存率仍低于15%。这种低存活率现象的原因之一是因为肿瘤患者对化疗药物的敏感性不同造成的。在化疗前或化疗中缺乏可靠的指标指导临床医师选择最优的化疗药物[3],仍是目前肺癌治疗亟待解决的问题。因此,研究一个个体化、能充分体现患者个体特征进而指导临床化疗的手段成为一种必需。原代细胞培养是直接从机体获取细胞、组织或器官进行体外培养。相对于一般研究所采用的成熟细胞系来说,原代培养的细胞可以更真实的反应机体的特征、更能代表患者的生物学和临床特性[4-6]。传统的肺癌原代培养是通过手术获取组织标本,采用酶消化法或组织块培养发进行原代培养[7-10]。然而多数肺癌患者诊断是已处于肺癌晚期,失去了手术治疗的机会,因此原代培养的组织标本获取受到限制。同时,组织来源的细胞进行原代培养时,细胞的生长环境发生较大变化,此时是否会在体外进行二次选择有待探讨。因此,组织来源的原代培养细胞用于检测化疗药物敏感性的可行度尚待进一步研究确定。而本实验尝试对肺癌患者的肿瘤细胞进行体外培养,考虑到多数患者诊断时已处于晚期,失去手术机会,因此选择肺癌合并胸腔积液患者,获取胸水中的肿瘤细胞,进行体外培养及鉴定,并检测其在体外对化疗药物的敏感性,该方法简单、安全,且更接近标本的生长环境,有望为下一步的个体化治疗提供临床依据。目的本实验尝试对肺癌患者的肿瘤细胞进行体外培养,考虑到多数患者诊断时已处于晚期,失去手术机会,因此选择肺癌合并胸腔积液患者,分离胸腔积液中的肺癌细胞进行体外培养,通过免疫荧光和裸鼠皮下移植瘤模型的建立鉴定体外培养是否成功。采用MTS比色法检测经过鉴定的细胞系对临床常用化疗药物的敏感性,通过与临床资料对比,进一步判断其是否具有预测肿瘤药物敏感性、指导临床治疗的作用。方法与郑州大学第一附属医院呼吸内科密切配合,无菌条件下收取最终诊断为“肺癌合并胸腔积液”的患者的胸水100mL于2个50mL离心管中,30分钟内带至实验室。经过处理后以含10%胎牛血清的DMEM/F12+GlutaMAX-l(1×)培养基在37℃,5%CO2,5%O2三气培养箱中培养。当细胞传代至20代左右时,细胞具有相似的形态特征、可以稳定的传代。此时通过免疫荧光(Pan-CK、TTF-1、P53、Ki67)和裸鼠皮下移植瘤的方法检测所培养的细胞是否确为肿瘤细胞。对经鉴定确定为肿瘤细胞的细胞进行体外细胞增殖能力检测。同时采用MTS比色发测定该细胞对临床常用化疗药物顺铂、卡铂、培美曲塞、吉西他滨、长春瑞滨、吉非替尼敏感性进行测定,对比其与临床实际药物敏感性是否一致。结果成功分离并培养肺腺癌细胞系1个,经免疫荧光和裸鼠皮下移植瘤的方法鉴定为肿瘤细胞。化疗药物敏感性结果显示该细胞系对培美曲塞、铂类、吉非替尼均较敏感,对吉西他滨及长春瑞滨的敏感性则不及对照组。这与该患者的临床治疗效果基本一致。结论胸水可以作为原代细胞培养的标本来源,较易分离纯化。该来源的肺癌细胞体外药物敏感性实验结果和临床实际化疗敏感性基本相符,有可能成为新的预测药物敏感性、指导个体化用药的工具。
【学位授予单位】：郑州大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2017
【分类号】：R734.2

文章目录

摘要

Abstract

英文缩略词表

1 前言

2 材料与方法

3 实验结果

4 讨论

5 结论

6 参考文献

综述肺癌的治疗及体外药物敏感性研究进展

参考文献（综述）

个人简历

在学期间发表的学术论文与研究成果

致谢

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