miR-124和miR-137在胶质母细胞瘤中的抑癌作用及其机制研究

发布时间：2018-05-20 19:23

  本文选题：胶质母细胞瘤 + micro　； 参考：《第四军医大学》2016年博士论文

【摘要】：研究背景:胶质瘤,又称神经胶质瘤,发病率高,治疗困难,其中恶性胶质瘤和胶质母细胞瘤是神经系统最常见的原发脑肿瘤,恶性程度极高,患者预后差,是仅次于胰腺癌和肺癌的对人类健康造成巨大影响的恶性疾病。目前胶质瘤的发病原因尚不清楚,遗传因素、病毒感染、头部外伤、放射照射、免疫抑制剂、内分泌和代谢紊乱等均可增加其发病率。关于胶质瘤的分子遗传学研究证实,7号染色体出现原癌基因增多和10号染色体出现抑癌基因缺失以及一些基因如EGFR、c-erb B1、H-ras、gli、N-myc等基因的异常扩增或表达,以及一些抑癌基因的丢失或者表达下调等,都是胶质瘤潜在的高危因素。mi RNA是一类长18-25个核苷酸的非编码RNA小分子,通过靶向沉默靶基因发挥转录后调控功能。mi RNA在机体几乎无处不在,具有广泛的生物学功能,尤其是在肿瘤发生发展以及肿瘤耐药中mi RNA是机体不可或缺的调控分子,其调控机制和具体作用方式也是复杂的。依据mi RNA在肿瘤中的作用可简单的划分为抑癌mi RNA和癌mi RNA,而mi R-124和mi R-137均属于抑癌mi RNA。虽然通过生物信息分析和一些实验已经证实其抑癌功能,但是具体作用机制尚不清楚。本文拟寻找mi R-124和mi R-137新的作用靶点,丰富其抑癌作用机制,同时为增强胶质瘤化疗耐药敏感性提供新的候选策略。第一部分:mi R-124在胶质母细胞瘤(GBM)细胞中的抑癌作用及机制研究目的:阐明mi R-124在GBM细胞中的抑癌机制及其在TMZ化疗耐药中的作用。方法:首先在GBM细胞中瞬时转染mi R-124 mimics过表达mi R-124然后给TMZ,检测了细胞的凋亡情况。随后构建了RAD51-3'UTR表达质粒进行mi R-124与RAD51的双荧光素酶报告基因实验。通过q RT-PCR和Western blot检测mi R-124过表达后RAD51在m RNA和蛋白水平的变化。瞬转mi R-124 mimics后给予TMZ处理,通过对γH2AX和RAD51的间接免疫荧光染色,进一步验证mi R-124与RAD51的靶标关系。最后通过RAD51干涉验证RAD51在TMZ治疗中的作用,并下载GEO数据分析RAD51表达量与GBM患者总体生存时间之间的关系。结果:Annexin V/PI检测证实过表达mi R-124能促进GBM细胞对TMZ的化疗敏感性。DLR、q RT-PCR、Western blot以及间接免疫荧光染色等一系列实验证实RAD51是mi R-124的直接靶基因。凋亡结果显示干涉RAD51同过表达mi R-124具有相似的生物学效应,均能够增强GBM细胞对TMZ化疗的敏感性。GEO数据生存分析证实RAD51表达量与GBM患者预后生存时间密切相关,RAD51表达量低的患者生存时间较长。结论:mi R-124直接靶向沉默RAD51,提高了GBM细胞对TMZ的化疗敏感性,促进细胞凋亡。第二部分:mi R-137在胶质母细胞瘤(GBM)细胞中的抑癌作用及机制研究目的:阐明mi R-137在GBM细胞中的抑癌机制及其在TRAIL治疗中的增敏作用。方法:首先在GBM细胞中瞬转mi R-137 mimics过表达mi R-137然后给TRAIL,检测了细胞的凋亡情况。随后通过q RT-PCR和Western blot检测从6个mi R-137潜在的靶分子中筛选出了XIAP基因,其在m RNA和蛋白水平均显著下调。进一步构建了XIAP-3'UTR表达质粒进行mi R-137与XIAP的双荧光素酶报告基因实验。通过q RT-PCR检测了15例临床GBM标本中mi R-137与XIAP表达水平的相关性。构建mi R-137稳定表达的慢病毒细胞株,并检测其功能。在mi R-137稳转细胞株中恢复XIAP表达检测凋亡比率。最后建立裸鼠皮下荷瘤模型验证mi R-137是否通过沉默XIAP增强TRAIL对GBM的治疗效果。结果:过表达mi R-137后能促进TRAIL对GBM细胞的杀伤作用,细胞凋亡率明显增加。q RT-PCR和Western blot检测证实过表达mi R-137后XIAP在m RNA和蛋白水平均显著下调。DLR实验证实了mi R-137直接结合于XIAP的3'UTR。15例临床标本中mi R-137和XIAP基因表达量的Pearson's相关性分析显示二者呈负相关。mi R-137稳定表达的慢病毒细胞株构建成功,“恢复”实验证实过表达mi R-137的细胞株中再次过表达XIAP后,mi R-137对TRAIL增敏的作用发生逆转。体外裸鼠荷瘤实验发现mi R-137通过直接靶向XIAP基因增强TRAIL敏感性,抑制裸鼠皮下肿瘤生长。结论:mi R-137直接靶向沉默XIAP,提高了GBM细胞对TRAIL的化疗敏感性,促进细胞凋亡。
[Abstract]:This paper studies the role of mi R - 124 and mi R - 137 as an indispensable regulator for human health . 妫，

本文编号：1915924