青蒿琥酯对化疗耐药癌细胞系裸鼠腮腺移植瘤增殖及耐药特性的影响

发布时间：2018-05-30 17:51

本文选题：青蒿琥酯 + 耐药逆转　；参考：《广西医科大学》2017年硕士论文

【摘要】：目的:通过建立具有化疗耐受性的肿瘤细胞裸鼠腮腺移植瘤模型,利用青蒿琥酯(Artesunate,ART)给药干预,观察和研究,在体内实验中青蒿琥酯是否对移植瘤的增殖存在影响及探讨其体内逆转顺铂(Cisplatin,DDP)耐药作用的相关机制。方法:选用人宫颈癌HELA细胞作为亲本细胞,在体外培养环境下,经低浓度、周期性顺铂作用的方法诱导获得具有多药耐药性的HELA-DDP细胞后,选用5周龄的BALB/C-nu雄性裸小鼠,采用经皮穿刺腮腺内接种耐药细胞的方式,于裸鼠腮腺内接种癌细胞,接种量为2×106细胞/30μl,建立化疗耐受性恶性肿瘤细胞裸鼠腮腺移植瘤模型。接种7天后观测成瘤情况,触诊观察动物接种侧腮腺,如触及圆形或类圆形硬结,视为裸鼠腮腺移植瘤建模注射成功。遂应用随机表法将裸鼠分为生理盐水对照组、DDP 1.0 mg/kg组、DDP 2.0 mg/kg组、ART 50.0 mg/kg组、ART 100.0 mg/kg组、ART 200.0 mg/kg组、联合用药组(ART 100 mg/kg+DDP 1.0 mg/kg),每组5只,共7组,隔日腹腔注射给药,观察裸鼠进食及精神状况,测量裸鼠体重及移植瘤长短径,绘制裸鼠体重变化曲线图、移植瘤生长曲线图,给药30天后处死动物,取瘤称重,并计算抑瘤率。取瘤体组织及裸鼠肝脏组织,HE染色光镜下观察各实验组的肿瘤组织及肝脏的病理性改变;透射电镜观察各实验组移植瘤中的耐药细胞内部超微结构的改变;免疫组化法、实时荧光定量PCR法及Western blot法检测移植瘤组织中耐药相关基因Survivin、MRP2、ERCC1的表达情况。结果:1.接种7日后,所有动物接种侧腮腺均出现硬结,经皮注射建模成瘤率达100%,瘤体均位于腮腺组织内,建模成功。给药干预4周后,各实验组的移植瘤体积均较生理盐水对照组的体积小,其中DDP2.0 mg/kg组的移植瘤平均体积最小,抑瘤率最高为59.86%(P0.01),但该组裸鼠体重减轻明显;青蒿琥酯各个浓度组的抑瘤率呈剂量依赖性,其中ART 200.0 mg/kg组的抑瘤率最高为43.54%(P0.05),ART100.0 mg/kg组和ART 50.0 mg/kg组抑瘤率分别为31.29%(P0.05)和10.2%(P0.05),且青蒿琥酯组裸鼠精神状态均良好,体重稳定增加;联合用药组的抑瘤率为41.16%(P0.05)虽然与ART 200.0mg/kg组相近,但该组裸鼠体重减轻,精神状态较差。2.HE染色结果显示:生理盐水组移植瘤的大部分肿瘤细胞生长较为旺盛,细胞的异形性比较其他实验组明显,核仁大且分裂象易见。给药干预后,DDP 200.0 mg/kg组和ART 200.0 mg/kg组的肿瘤细胞体积较生理盐水组小,细胞核出现了深染、固缩的现象,核染色质明显浓缩、碎裂成片状,核分裂象少见,细胞间可见大片红染的、无结构的玻璃样变区。裸鼠肝脏切片可见生理盐水组和青蒿琥酯组的肝细胞形态结构正常,而顺铂用药组随着浓度的增加肝细胞出现水肿及空泡性改变的现象更为明显,且胞浆出现红色颗粒样结构,肝小叶结构混乱,组织间隙明显增宽。3.透射电镜结果显示:给药干预后可见,DDP 200.0 mg/kg组和ART 200.0 mg/kg组移植瘤组织细胞的细胞膜的连续性明显遭到破坏呈现为不完整的状态,细胞质内可以发现呈不同程度的空泡性改变,甚至发生崩解;可见线粒体内出现了不同程度的肿胀,细胞质内也发生了空泡化的改变,可见细胞核被细胞质内的空泡挤压偏至一侧。4.免疫组化结果显示:青蒿琥酯组的移植瘤组织中Survivin、MRP2根据蛋白表达量所测算出的平均光密度值(MOD)随ART浓度的升高而降低。5.RT-qPCR结果显示:随青蒿琥酯浓度增加,移植瘤组织中的耐药基因Survivin、MRP2和ERCC1的m RNA表达量均呈下调趋势(P0.01)。6.Western blot结果显示:随青蒿琥酯浓度增加,移植瘤组织中的耐药相关蛋白Survivin、MRP2的表达水平均出现显著的下调趋势(P0.001)。结论:1.本课题组前期诱导的具有稳定的多药耐药性的耐药细胞系具有较强的细胞活性及致瘤性,可在裸鼠腮腺建立裸鼠腮腺移植瘤模型。2.青蒿琥酯在体内实验中能有效抑制移植瘤的增殖,且在裸鼠体内使用时产生的毒副作用较顺铂小。3.青蒿琥酯在体内实验中能下调耐药细胞中耐药相关基因Survivin、MRP2、ERCC1的m RNA表达及下调Survivin、MRP2的蛋白表达,这可能与青蒿琥酯能逆转耐药性有关。
[Abstract]:Objective : To study the effect of arteannuin ( ART ) on the proliferation of transplanted tumor and to explore the mechanism of reversing cisplatin ( DDP ) resistance in nude mice . The results were as follows : 1 . The tumor cells in the experimental group were significantly less than those in the normal saline control group . The results showed that the expression of Survivin , MRP2 and ERCC1 in the transplanted tumor tissues decreased with the increase of the concentration of ART . Conclusion : In vivo experiments , the expression of Survivin , MRP2 and ERCC1 in the transplanted tumor tissues decreased with the increase of ART concentration .
【学位授予单位】：广西医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2017
【分类号】：R739.8

【参考文献】