OCIAD1在胰腺癌中的生物学功能及相关机制研究

发布时间：2018-05-31 05:09

本文选题：胰腺癌 + OCIAD1　；参考：《第二军医大学》2016年博士论文

【摘要】：胰腺癌(panreatic cancer)是我国高发的恶性肿瘤之一,也是一种预后很差的恶性肿瘤。其发病后2年的死亡率占常见肿瘤死亡率的第一位。我国每年死于胰腺癌的患者大约数万人,表明胰腺癌威胁着我国国民的身体健康。并且近年来胰腺癌的发病率逐年上升。每年世界范围内超过200000人死于胰腺癌。其中,发达国家的发病率和死亡率最高。在美国,胰腺癌在所有肿瘤死因中居第四位,每年新诊断的胰腺癌超过28000例。在日本,其在肿瘤死因中居第五位,每年有超过20000个新发病例。在发展中国家,胰腺癌的发病率也有逐年升高的趋势。由于胰腺癌的致死性很强,其发病率基本上与死亡率一致。胰腺癌的治疗以手术切除为主,但胰腺癌手术切除后5年生存期低于20%,术后整体生存时间不超过2年。胰腺癌高转移和高复发的特性成为影响患者预后的关键因素。根据报道经根治性切除的胰腺癌患者,术后1年复发率高达60%。因此,深入研究胰腺癌的转移、复发机制并积极探索有效的治疗措施成为当前胰腺癌诊治中迫切需要解决的重要问题。但胰腺癌诊断时往往已近晚期,许多患者因此失去了手术机会,胰腺癌的诊治始终是肿瘤研究领域的热点。人OCIAD1(卵巢癌免疫反应抗原结构域蛋白1)基因定位于染色体4p11,该基因由9个外显子和8个内含子组成,转录翻译产生的OCIAD1由2个氨基酸序列拼接片段组成,其中长片段含245个氨基酸(27.6Kda),短片段含208个氨基酸(20.7Kda),它是一种1型跨膜蛋白,在进化过程中具有较高的保守性。可参与细胞外识别、细胞间粘附、细胞骨架形成和细胞内信号传导等重要的生理和病理过程。近年来的研究发现OCIAD1在卵巢癌、甲状腺癌的表达水平影响整合素功能,过表达OCIAD1可提高细胞整合素与胞外基质间的相互作用,从而调节癌细胞的迁移和转移。在卵巢癌细胞二次定殖试验中发现,以RNAi技术拟制COIAD1表达,LPA诱导的胶原蛋白1和整合素10/11粘附作用降低。我们通过基因芯片技术、半定量PCR、Western Blot等方法发现OCIAD1在胰腺癌组织中的表达明显高于癌旁,在低分化的胰腺癌细胞中的表达高于高分化的胰腺癌细胞,调节OCIAD1的表达可以明显影响胰腺癌细胞的迁移,进一步研究发现OCIAD1可能通过靶向作用于ATM(ataxia telangiectasia-mutated,毛细血管扩张性共济失调症突变蛋白)影响胰腺癌细胞的迁移,提示OCIAD1基因在胰腺癌发展过程中起着重要作用。研究结果有望为胰腺癌的诊断、治疗和预后提供新的靶点。第一部分OCIAD1在胰腺癌中的表达及临床意义目的在新鲜胰腺癌患者组织中检测OCIAD1的表达,并阐明其临床意义。通过生物信息学分析,验证OCIAD1在胰腺癌组织中异常表达情况,在细胞株信息中检测OCIAD1的表达,并与管家基因对比,进一步验证高表达情况。方法应用western blot方法检测2013.3-2013.9中连续入组的16例接受根治性切除患者配对胰腺癌组织和癌旁组织中OCIAD1的表达水平,了解目标基因的表达情况,结合临床资料,分析表达与临床的关系。R语言进行生物信息分析和GSEA分析胰腺癌基因芯片中OCIAD1异常表达情况,验证其高表达。在22株胰腺癌细胞株中检测OCIAD1与管家基因的表达,并进行对比,进一步验证OCIAD1的高表达。结果收集的临床新鲜胰腺癌组织中用western blot法从蛋白水平证实OCIAD1在胰腺癌组织中呈过表达。临床资料分析发现,OCIAD1表达与肿瘤恶性程度相关。生物信息学分析胰腺癌基因芯片表达谱验证了OCIAD1在胰腺癌中的高表达,并且在22株胰腺癌细胞株中得到进一步验证,小结胰腺癌组织中OCIAD1呈差异表达,癌组织中明显高于癌旁组织,OCIAD1在胰腺癌中的差异表达与临床肿瘤恶性程度相关,可能影响胰腺癌的发展。第二部分OCIAD1对胰腺癌细胞迁移功能的影响目的通过细胞学实验,检验OCIAD1影响胰腺癌细胞迁移的功能。方法调节OCIAD1在胰腺癌细胞系As PC-1、Bs PC-1、SW1990、CAPAN中的表达,检测OCIAD1表达变化时,胰腺癌细胞迁移和侵袭能力的改变。结果成功构建了稳定低表达和过表达OCIAD1的胰腺癌细胞系。调节OCIAD1在胰腺癌细胞系中表达时,胰腺癌细胞的迁移能力受到影响。体外上调OCIAD1表达时,胰腺癌细胞系的迁移能力提高;下调OCIAD1表达时出现相反的变化。在侵袭实验中得到了同样的结果。小结OCIAD1调节胰腺癌迁移和侵袭,可能在胰腺癌转移和发展过程中发挥重要作用。第三部分OCIAD1影响胰腺癌迁移的机制研究目的生物信息学方法分析胰腺癌中与OCIAD1相关的激酶,确定可能的作用激酶,并探索其可能的作用机制。方法选择基因芯片,通过生物信息学分析胰腺癌中可能与OCIAD1相关的激酶;过表达和干扰OCIAD1在胰腺癌细胞系中表达,检测ATM的表达变化。双向调节OCIAD1和ATM的表达,研究两者在胰腺癌中的作用机制。结果在胰腺癌细胞系中OCIAD1和ALK成正相关、和ATM成负相关。进一步验证发现OCIAD1和ATM的负相关可信度高。双向调节OCIAD1和ATM在胰腺癌细胞系中的表达,发现OCIAD1调控ATM水平,可能通过抑制细胞DNA的损伤修复等途径,促进胰腺癌细胞的迁移等,进而影响胰腺癌的发展和预后。小结OCIAD1和ATM的表达成负相关,在胰腺癌中可能通过抑制DNA损伤修复等发挥促癌作用。全文结论:OCIAD1在胰腺癌组织中高表达,并与胰腺癌患者临床分级分期密切相关,调节OCIAD1的表达能够影响胰腺癌细胞的迁移。OCIAD1和ATM的表达成负相关,OCIAD1调控ATM水平,OCIAD1过表达促进胰腺癌的发展可能通过影响ATM介导的DNA损伤修复等途径来实现。
[Abstract]:Human OCIAD1 ( ovarian cancer immune response antigen domain protein 1 ) is located on chromosome 4p11 . The expression of OCIAD1 in pancreatic cancer cell line As PC - 1 , Bs PC - 1 , SW1990 , CAPAN was studied .
【学位授予单位】：第二军医大学
【学位级别】：博士
【学位授予年份】：2016
【分类号】：R735.9

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