骨肉瘤miRNA-34a基因启动子甲基化水平改变及其调控作用研究
本文选题：骨肉瘤 + miRNA-34a ； 参考：《宁夏医科大学》2017年硕士论文
【摘要】：目的检测骨肉瘤miRNA-34a启动子甲基化水平,观察去甲基化对人骨肉瘤细胞增殖及其miRNA-34a表达的影响,探讨骨肉瘤miRNA-34a启动子甲基化的调控作用。方法运用实时定量PCR(real-time PCR)检测对比人骨肉瘤细胞株(MG-63、SAOS-2)及成骨细胞株(hFOB1.19)中miRNA-34a的表达差异;采用基质辅助激光解吸附电离飞行时间质谱分析质谱技术(MALDI-TOF)检测对比人骨肉瘤细胞与成骨细胞、骨肉瘤蜡块组织与正常骨组织中mi RNA-34a启动子CpG岛甲基化水平的差异;用1%5-氮杂-胞苷(5-Aza-2’-deoxycytidine,Aza)对人骨肉瘤细胞进行去甲基化处理,观察去甲基化处理后人骨肉瘤细胞生长状态,并检测分析去甲基化处理前后人骨肉瘤细胞中mi RNA-34a表达量及其启动子甲基化水平的变化。结果miRNA-34a在MG-63、SAOS-2细胞中的表达量明显低于hFOB1.19细胞,差异具有统计学意义(P0.05)。MG-63、SAOS-2细胞中miRNA-34a基因启动子CpG岛甲基化水平高于hFOB1.19细胞,差异具有统计学意义(P0.05)。骨肉瘤组织中mi RNA-34a基因启动子CpG岛甲基化水平高于正常骨组织对照组,差异具有统计学意义(P0.05);MG-63、SAOS-2细胞经去甲基化处理后生长增殖受限,检测miRNA-34a均表达上调(P0.05),且miRNA-34a启动子CpG岛甲基化水平均降低(P0.05)。结论骨肉瘤miRNA-34a基因启动子为高甲基化水平,miRNA-34a基因表达下调与其启动子高甲基化修饰有关,进而影响了其抑制骨肉瘤的生物学作用;提示miRNA-34a基因与DNA甲基化的调控修饰可能参与了骨肉瘤的增殖发展过程。
[Abstract]:Objective to investigate the effect of demethylation on the proliferation of human osteosarcoma cells and the expression of miRNA-34a in osteosarcoma by detecting the methylation level of miRNA-34a promoter in osteosarcoma, and to explore the regulation of the methylation of miRNA-34a promoter in osteosarcoma. Methods the expression of miRNA-34a in human osteosarcoma cell line MG-63 (SAOS-2) and osteoblast cell line hFOB1.19 was detected by real-time PCR. Matrix assisted laser desorption ionization time of flight mass spectrometry (MALDI-TOF) was used to detect and compare the methylation levels of mi RNA-34a promoter in human osteosarcoma cells and osteoblasts, osteosarcoma wax masses and normal bone tissues. Human osteosarcoma cells were demethylated with 5-Aza-2-aza-cytidine Aza, and the growth status of human osteosarcoma cells after demethylation was observed. The expression of mi RNA-34a and the methylation level of its promoter in human osteosarcoma cells before and after demethylation were detected and analyzed. Results the expression of miRNA-34a in MG-63nSAOS-2 cells was significantly lower than that in hFOB1.19 cells, and the difference was statistically significant. The methylation level of the promoter CpG island of miRNA-34a gene was higher than that of hFOB1.19 cells, and the difference was statistically significant (P 0.05). The methylation level of CpG island promoter of miRNA-34a gene in osteosarcoma tissue was higher than that in normal bone tissue, and the difference was statistically significant. The expression of miRNA-34a was up-regulated, and the methylation level of CpG island of miRNA-34a was decreased. Conclusion the down-regulation of miRNA-34a gene expression in osteosarcoma may be related to the hypermethylation modification of the promoter, which may affect the biological inhibition of osteosarcoma. These results suggest that the regulatory modification of miRNA-34a gene and DNA methylation may be involved in the proliferation and development of osteosarcoma.
【学位授予单位】：宁夏医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2017
【分类号】：R738.1
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，本文编号：1992244
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