ADAM17-shRNA在缺氧条件下对人乳腺癌细胞MCF-7增殖的影响

发布时间：2018-06-07 23:31

  本文选题：RNA + 聚合酶链反应　； 参考：《重庆医学》2017年01期

【摘要】：目的研究在缺氧环境下靶向针对解聚素-金属蛋白酶17(ADAM17)的短发夹状RNA(shRNA)对人乳腺癌MCF-7细胞增殖的影响。方法针对ADAM17设计4个特异性的ADAM17-shRNA,经电穿孔法转染MCF-7细胞。缺氧条件下培养细胞。试验分为:对照组(空白磷酸盐缓冲液)、无义序列组(转染无义序列ADAM17-shRNA)和shRNA转染组(转染ADAM17-shRNA,选择沉默ADAM17基因效率最高的shRNA用于后续试验)。分别采用实时荧光定量PCR、iCELLigence、流式细胞仪检测细胞ADAM17mRNA的表达水平、细胞增殖活性和细胞周期变化。结果 4个shRNA转染组对MCF-7细胞的ADAM17基因表达均有沉默作用,与对照组及无义序列组相比,差异具有统计学意义(P0.05),尤以shRNA1219抑制率最高(F=5.11,P0.01)。shRNA转染组的细胞生长速度和增殖活性较对照组和无义序列组显著降低,差异有统计学意义(P0.05)。shRNA转染组的绝大多数细胞停留在G0/G1期(73.35±2.45),与对照组(62.56±2.35)、无义序列组(62.68±1.20)相比较,差异有统计学意义(P0.05),细胞周期进展明显延缓。结论 ADAM17-shRNA在缺氧条件下抑制乳腺癌细胞MCF-7的增殖。
[Abstract]:Objective to study the effects of short hairpin RNA-shRNAs targeting depolymerin-metalloproteinase-17 (ADAM17) on the proliferation of human breast cancer MCF-7 cells under hypoxia. Methods four specific ADAM17-shRNAs were designed for ADAM17 and transfected into MCF-7 cells by electroporation. Cells were cultured under anoxic conditions. The experiment was divided into three groups: control group (blank phosphate buffer solution), nonsense sequence group (transfected with ADAM17-shRNAs) and shRNA transfection group (transfected with ADAM17-shRNAs). The shRNA with the highest efficiency of silencing ADAM17 gene was selected for further experiment. The expression of ADAM17 mRNA, cell proliferation activity and cell cycle were measured by flow cytometry. Results the expression of ADAM17 gene in MCF-7 cells was silenced in the four shRNA transfection groups, compared with the control group and the nonsense sequence group. The difference was statistically significant (P 0.05). The cell growth rate and proliferation activity of shRNA1219 group were significantly lower than those of control group and nonsense sequence group. The difference was statistically significant in the majority of cells in the G _ 0 / G _ 1 phase (73.35 卤2.45), compared with the control group (62.56 卤2.35) and the nonsense sequence group (62.68 卤1.20). The difference was statistically significant (P 0.05), and the progress of cell cycle was significantly delayed. Conclusion ADAM17-shRNA inhibits the proliferation of breast cancer cell line MCF-7 under hypoxia.
【作者单位】： 华北理工大学附属医院肿瘤外科;
【基金】：河北省自然科学基金资助项目(C2010001767) 唐山市科学技术研究与发展计划项目(14130256B)
【分类号】：R737.9

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本文编号：1993291