GA6通过调节自噬在肿瘤发生发展中的机制研究

发布时间：2018-06-22 09:43

  本文选题：自噬 + 肿瘤　； 参考：《中国人民解放军医学院》2016年硕士论文

【摘要】：目的：自噬是细胞在有害刺激如饥饿、低氧、生长因子缺乏等条件下利用溶酶体降解大分子物质以及自身受损的细胞器的一个过程,在生物细胞内多数的长半衰期蛋白质都可以通过自噬这一途径来进行降解,进而达到维持细胞内环境的稳定。众所周之，自噬是真核生物在进化过程中高度保守的分解代谢方式,它和凋亡是细胞程序性死亡的两种形式，自噬与肿瘤的发生发展有密切的关系,而我们研究的GA是一个较新的基因，对于其在肿瘤中的作用研究才刚刚起步,也很局限,本课题以GA6为基础,针对主要参与自噬的基因进行研究,旨在通过探索GA6调控肿瘤细胞自噬的分子机制,为今后以GA6为靶标的临床药物应用提供理论依据。方法：利用生长曲线、克隆形成、划痕实验来验证GA6对肿瘤细胞的生长、增殖、迁移情况的影响。采用PCR技术从人的乳腺文库中扩增出我们所需的目的基因片段，将这些序列插入到pGEX-KG、pET-28a、GST等载体中,构建出重组质粒：western blot验证过表达和敲低GA6对自噬的影响。体外给予自噬诱导条件，，通过免疫荧光实验观察GA6与LC3B的共定位情况。免疫共沉淀验证GA6与自噬相关基因是否有相互作用：GST pull-down技术及蛋白体外作用技术验证GA6对Atg4B和LC3B作用的影响。结果：GA6能促进肿瘤细胞的生长、增殖和迁移：GA6与LC3B存在共定位,且是自噬发生发展过程中所必须的;GA6与Atg4B、LC3B存在间接和直接的相互作用,且与LC3B的作用强于与Atg4B的相互作用;GA6与P62、BNIP3、Atg3、 Atg5、Atg7、Atg12不存在相互作用,且不影响ATG5与ATG12的相互作用;GA6能直接竞争性抑制Atg4B对LC3B的切割作用。结论：GA6能通过竞争性抑制△tg4B寸LC3B的切割作用,阻碍LC3B前体蛋白Pro-LC3B被Atg4B切割转化成LC3B-Ⅰ,进而抑制自噬,GA6能促进肿瘤细胞的生长、增殖和侵袭,是一个癌基因。
[Abstract]:Objective : To investigate the effect of GA6 on the growth , proliferation and migration of tumor cells . The results showed that GA6 could promote the growth , proliferation and migration of tumor cells . The results showed that GA6 could promote the growth , proliferation and migration of tumor cells . GA6 can inhibit the cleavage of LC3B by competitive inhibition , which can prevent LC3B precursor protein Pro - LC3B from being cleaved by Atg4B to LC3B - 鈪

本文编号：2052423