TM4SF1在胶质瘤的表达及其对胶质瘤病人预后的影响

发布时间：2018-06-26 23:01

  本文选题：胶质瘤 + 预后　； 参考：《河北医科大学》2015年博士论文

【摘要】：胶质瘤是人类中枢神经系统中最常见的一类原发恶性肿瘤,约占颅内原发肿瘤的40%~60%,至今仍然是中枢神经系统肿瘤中预后最差的一类肿瘤。目前,胶质瘤的治疗通常是手术治疗联合放射治疗和化学治疗等综合治疗。近些年来,虽然在神经影像技术、神经显微外科技术以及放射治疗和化学治疗等方面取得了突飞猛进的发展,但是对于胶质瘤患者而言,其手术以后的复发率仍然接近100%,中位生存时间不足1年。研究表明,低级别胶质瘤的平均存活时间是3~5年,而高级别胶质瘤的平均存活时间是1~2年。虽然世界卫生组织对胶质瘤的分级标准至今仍然是评价胶质瘤患者预后的金标准,但是对于个体胶质瘤患者生存时间的判断而言,这个标准仍然有限。国内外研究发现,一些肿瘤的分子标志物的表达水平,例如PTEN基因,可以作为一项独立的因子来影响胶质瘤患者的预后生存时间,但是像这样能够独立影响胶质瘤患者预后生存时间的分子标志物还比较少,因此需要发现更多的影响胶质瘤患者预后生存时间的分子标志物。Transmembrane-4-L-six-family-1(TM4SF1),也被称为肿瘤相关抗原L6(TAL6),是四次跨膜蛋白家族成员之一,在培养的内皮细胞中高度表达。目前将其归入L6家族,其家族成员还包括TM4SF4、TM4SF5、TM4SF18、TM4SF19、TM4SF20等。TM4SF1是在进行肺癌的免疫治疗时作为一种抗原被首次发现的,在随后的研究中发现其在许多上皮来源的肿瘤中高表达,如结肠癌、乳腺癌、胰腺癌、卵巢癌、肾癌、前列腺癌等,并与这些肿瘤患者的预后密切相关。同时TM4SF1可促进胰腺癌、卵巢癌等多种肿瘤的迁移与侵袭,但具体相关机制尚未明确。TM4SF1在胶质瘤组织中的表达以及TM4SF1的表达程度与胶质瘤患者预后的相关研究目前尚未见报道。因此,我们应用免疫组织化学、蛋白免疫印迹以及实时定量q RT-PCR的方法,检测了TM4SF1在对照脑组织和不同级别脑胶质瘤组织标本中的蛋白及m RNA的表达水平。应用实时定量q RT-PCR以及蛋白免疫印迹的方法确认胶质瘤细胞株TM4SF1的表达;并分析胶质瘤患者的相关临床因素,通过单因素以及多因素生存分析,探讨这些临床因素及TM4SF1的表达水平对患者预后生存时间的影响。第一部分TM4SF1在人脑胶质瘤组织的表达及其与病理分级的相关性目的:确定TM4SF1在人脑胶质瘤组织中的表达,并分析TM4SF1的表达水平与胶质瘤分级之间的相关性。方法：1组织标本的收集:收集近期在河北医科大学第二医院神经外科住院并行手术切除的72例人脑胶质瘤组织标本及8例对照脑组织标本。胶质瘤标本均由河北医科大学第二医院神经病理医师确诊,并依据2007年WHO分级对所有样本进行病理分级,作为对照组的8例脑组织取自脑出血或脑外伤需行内减压术的患者。每例组织分两部分留取,一部分置于10%福尔马林液中固定,另一部分保存于2ml无菌冻存管并立即投至液氮中速冻。2应用免疫组织化学方法检测72例人脑胶质瘤组织及8例对照脑组织中TM4SF1的表达,并分析其与病理分级的相关性。3应用实时定量聚合酶链反应(PCR)方法测定72例人脑胶质瘤组织及8例对照脑组织中TM4SF1 m RNA的相对表达水平,并比较其表达差异。4应用蛋白质免疫印迹(Western blot)方法检测72例人脑胶质瘤组织及8例对照脑组织中TM4SF1蛋白的表达,并比较其表达差异。结果：1免疫组织化学结果:TM4SF1在胶质瘤组织中的阳性高表达率为52.78%(38/72),TM4SF1在8例对照脑组织中均无阳性表达,在各级别的胶质瘤细胞中均可见到TM4SF1蛋白表达,与对照脑组织具有显著的统计学意义(P0.01);低级别(I、II级)和高级别(III、IV级)胶质瘤组织阳性表达率分别为70.83%(17/24)和95.83%(46/48),差异具有统计学意义(P0.01)。随着胶质瘤级别的升高,TM4SF1蛋白表达逐渐增强,TM4SF1表达与胶质瘤恶性程度存在正相关(rs=0.95,P0.05)。测量各级别的人脑胶质瘤组织与对照脑组织的平均光密度值(AOD),统计分析发现,对照组、低级别胶质瘤组和高级别胶质瘤组之间存在显著的差异性(P0.05),且高级别胶质瘤组与低级别胶质瘤组的平均光密度值(AOD)均明显高于对照组(P0.05),高级别胶质瘤组的平均光密度值(AOD)也明显高于低级别胶质瘤组(P0.05)。对胶质瘤组织的细胞密度进行的分析表明,高级别胶质瘤组与低级别胶质瘤组之间不存在显著性差异。2 q RT-PCR结果:TM4SF1 m RNA在对照脑组织、低级别胶质瘤及高级别胶质瘤中的相对表达量具有显著性差异(P0.05)。与低级别胶质瘤组(0.626±0.452)相比,高级别胶质瘤组(2.117±0.618)的TM4SF1m RNA相对表达量升高了238.4%。3 Western blot结果:TM4SF1蛋白在对照脑组织、低级别胶质瘤及高级别胶质瘤中的相对表达量具有显著性差异。与对照脑组织相比,TM4SF1蛋白在低级别级脑胶质瘤中相对表达量明显升高,差异具有统计学意义(P0.05)。与低级别级脑胶质瘤相比,TM4SF1蛋白在高级别级脑胶质瘤中相对表达量明显升高,差异具有统计学意义(P0.05)。与对照脑组织相比,TM4SF1蛋白在高级别级脑胶质瘤中相对表达量显著升高,差异具有统计学意义(P0.01)。结论：1 TM4SF1在人脑胶质瘤组织中高度表达,且其表达随着胶质瘤病理级别的升高而增加,高级别脑胶质瘤的表达要高于低级别脑胶质瘤,差异具有统计学意义。2 TM4SF1的表达水平与胶质瘤级别的升高呈显著的正相关,提示TM4SF1能成为脑胶质瘤临床分级的重要分子标志物。第二部分TM4SF1在胶质瘤细胞株U87、U251中的表达目的:检测TM4SF1在人脑胶质瘤细胞株U87和U251中的表达。方法：1应用实时定量聚合酶链反应(q RT-PCR)测定U87和U251细胞株中TM4SF1 m RNA的表达。2应用蛋白质免疫印迹(Western blot)方法检测U87和U251细胞株中TM4SF1蛋白的表达。结果：1 q RT-PCR结果:在人脑胶质瘤细胞株U87、U251及作为阳性对照的结直肠癌细胞株HCT116均检测到了TM4SF1 m RNA的表达,数据分析表明,三组间TM4SF1 m RNA表达水平的差异不明显,无统计学意义。2 Western blot结果:在人脑胶质瘤细胞株U87、U251及作为阳性对照的结直肠癌细胞株HCT116均检测到了TM4SF1蛋白的表达,数据分析表明,三组间TM4SF1蛋白表达的差异不明显,无统计学意义。结论:在人脑胶质瘤细胞株U87、U251中TM4SF1均表达阳性,二者表达程度无明显差异。第三部分TM4SF1的表达水平及相关临床因素与胶质瘤患者预后的多因素生存分析目的:探讨影响脑胶质瘤患者生存和预后的重要因素,从而更加准确地判断脑胶质瘤病人的预后情况,以便进一步改善脑胶质瘤病人的预后。方法:查阅并记录这72例胶质瘤患者的临床病例资料,分别了解这72例患者的性别、年龄、术前KPS评分、术前有无抽搐、肿瘤直径、肿瘤术中切除范围、肿瘤病理分级以及TM4SF1的表达程度。首先采用Kaplan-Meier法进行单因素分析,分别考察患者的相关临床因素及TM4SF1的表达程度对存活时间的影响。差异的显著性检验采用Log-rank法。对单因素分析中P0.05者以前进法(Forward:LR)进行COX回归多因素模型分析。结果：1单因素分析结果:对选定的8项因子使用Kaplan-Meier法进行单因素分析后发现,患者年龄、术前KPS评分、肿瘤切除范围、肿瘤病理分级、TM4SF1的表达程度对于胶质瘤患者的预后有影响,具有统计学意义(P0.05)。2多因素分析结果:对Kaplan-Meier法进行单因素分析发现的具有统计学差异的5项因子进行多因素分析。以前进法(Forward:LR)进行COX回归多因素模型分析后发现,肿瘤病理分级以及TM4SF1的表达程度这2项因子对胶质瘤患者的预后有影响,可以作为影响患者预后的独立危险因素(P0.05)。结论:胶质瘤患者的肿瘤病理级别越高,TM4SF1的表达越强,患者生存时间越短。胶质瘤的病理分级及TM4SF1的表达程度这2项因素可以作为影响患者预后的独立危险因素。
[Abstract]:In recent years , the expression levels of TM4SF4 , TM4SF5 , TM4SF18 , TM4SF19 , TM4SF20 , etc . Methods : The expression of TM4SF mRNA in human brain glioma tissues and 8 control brain tissues were determined by immunohistochemical method . The expression of TM4SF1mRNA in human glioma cell line U87 and U251 was significantly higher than that in control group ( P0.05 ) . Objective : To investigate the prognostic factors of glioma patients by using Kaplan - Meier method .
【学位授予单位】：河北医科大学
【学位级别】：博士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：R739.4
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本文编号：2071720