靶向Trop-2 CAR-T细胞的制备及其体外对卵巢癌细胞杀伤作用的研究
本文选题：嵌合抗原受体 + Trop- ； 参考：《南京医科大学学报(自然科学版)》2017年06期
【摘要】：目的:制备靶向人滋养层细胞表面抗原2(human trophoblast cell surface antigen 2,Trop-2)的嵌合抗原受体T细胞(chimeric antigen receptor T cell,CAR-T),观察Trop-2 CAR-T细胞在体外对卵巢癌细胞增殖的影响。方法:运用分子克隆及基因重组技术构建Trop-2 CAR;采用Western blot检测Trop-2 CAR在293T细胞中的表达;CCK-8法检测Trop-2 CAR-T细胞对卵巢癌细胞增殖的影响;ELISA检测细胞因子分泌的变化。结果:酶切鉴定及测序分析结果表明,Trop-2 CAR各基因片段连接正确;Western blot检测结果显示,该质粒能够在293T细胞中有效表达;CCK-8结果显示,制备的Trop-2 CAR-T细胞在体外能明显抑制表达Trop-2的卵巢癌细胞的增殖(P0.05);ELISA检测结果表明Trop-2 CAR-T细胞与表达Trop-2的卵巢癌细胞共培养后,干扰素(interferon-γ,IFN-γ)、白介素(interleukin-2,IL-2)细胞因子分泌增加(P0.01)。结论:该研究成功制备了Trop-2 CAR-T细胞,可有效抑制Trop-2表达阳性的卵巢癌细胞的增殖。
[Abstract]:Objective: to prepare the chimeric antigen receptor T cells (chimeric antigen receptor T cell) of human trophoblast cell surface antigen 2 (human trophoblast cell surface antigen 2, Trop-2), and to observe the effect of chimeric antigen receptor T cell on the proliferation of ovarian cancer cells in vitro. Western blot was used to detect the expression of Trop-2 CAR in 293T cells; CCK-8 method was used to detect the effect of Trop-2 CAR-T cells on the proliferation of ovarian cancer cells; ELISA detected the changes of cytokine secretion by ELISA. Results: the results of enzyme digestion and sequencing analysis showed that Trop-2 CAR gene fragments were connected correctly; Western detection results showed that the plasmid could be in The effective expression of 293T cells; CCK-8 results showed that the Trop-2 CAR-T cells could inhibit the proliferation of Trop-2 cells in vitro (P0.05) in vitro (P0.05); ELISA detection results showed that Trop-2 CAR-T cells were co cultured with ovarian cancer cells expressing Trop-2, interferon (interferon-, IFN- gamma), and interleukins Conclusion: This study successfully prepared Trop-2 CAR-T cells, which can effectively inhibit the proliferation of Trop-2 positive ovarian cancer cells.
【作者单位】： 南京医科大学病理学系;南京医科大学国家卫计委抗体技术重点实验室;南京医科大学第二附属医院耳鼻喉科;安徽未名细胞治疗有限公司;南京医科大学附属南京妇幼保健院妇产科;南京军区军事医学研究所;
【基金】：国家自然科学基金(81602119) 江苏省科学技术厅重点研发专项基金(BE2016799)
【分类号】：R737.31
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，本文编号：2072542
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