肝癌患者及健康人外周血Vγ9Vδ2 T细胞体外扩增前后亚型及免疫功能检测

发布时间：2018-07-02 15:08

  本文选题：原发性肝癌 + Vγ9Vδ2T细胞　； 参考：《山西医科大学》2016年硕士论文

【摘要】：目的:检测HCC患者外周血的Vγ9Vδ2T细胞比例,分化成熟分型,免疫杀伤功能与健康人差别,体外扩增的效果及上述指标的变化。方法:采集HCC病人(n=25)和健康捐献者(n=20)外周血共10 ml,采用不连续密度梯度离心法分离单核细胞层。1.应用流式细胞术检测Vγ9Vδ2T细胞占总T细胞比例,检测分化成熟亚型,分泌IFN-γ和表达CD107a的细胞比例。2.分离的淋巴细胞加入GT-T551淋巴细胞培养基,唑来膦酸和IL-2加入培养基,37℃,5%CO2培养箱中培养,2-3d定期加入IL-2,12-14d后收获细胞。3.再次应用流式细胞术检测Vγ9Vδ2T细胞占总T细胞比例,分化成熟亚型,分泌IFN-γ和表达CD107a的细胞比例。结果:1.健康人组18例扩增成功,2例细胞扩增失败。患者组21例扩增成功,4例细胞扩增失败。2.培养前HCC患者外周血中Vγ9Vδ2T细胞占总T细胞比例低于健康人,分化成熟比例在培养前与健康人相比无差异,分泌IFN-γ和表达CD107a比例与健康人相比无差异。3.体外扩增培养后HCC患者与健康人外周血中Vγ9Vδ2T细胞占总T细胞比例明显升高。分化成熟亚型与扩增前对比发现,培养后Tn、Tcm、Temra的比例较扩增前下降,患者和健康人Tem,Tem+Temra(总效应型)明显升高。扩增后HCC患者和健康人外周血中Vγ9Vδ2T细胞分泌IFN-γ和表达CD107a比例与扩增前无差异。4.扩增后HCC患者外周血Vγ9Vδ2T细胞比例,分化成熟亚型,分泌IFN-γ和表达CD107a比例与健康人对比无差异。结论:1.HCC患者外周血Vγ9Vδ2T细胞比例低于健康人,分化成熟亚型的分布与健康人相似,分泌IFN-γ和表达CD107a比例与健康人无差异。2.健康人和肝癌患者PBMCs经过体外加入唑来膦酸+IL-2刺激,都可高度扩增Vγ9Vδ2T细胞。扩增后分化成熟亚型中总效应细胞型明显升高,分泌IFN-γ和表达CD107a比例无差异。3.这种方法可以为下一步过继细胞免疫治疗和实验研究和临床应用提供合适的Vγ9Vδ2T细胞。
[Abstract]:Aim: to detect the percentage of V 纬 9V 未 2T cells in peripheral blood of patients with HCC, the differentiation and maturation type, the difference of immune killing function between HCC patients and healthy people, the effect of amplification in vitro and the changes of the above indexes. Methods: peripheral blood samples from patients with HCC (nong25) and healthy donors (nong20) were collected and the monocyte layer was isolated by discontinuous density gradient centrifugation. Flow cytometry was used to detect the percentage of V 纬 9V 未 2T cells to total T cells, to detect the mature subtypes of differentiation, to secrete IFN- 纬 and to express CD107a. The isolated lymphocytes were added to the GT-T551 lymphocyte culture medium. Zoledronic acid and IL-2 were added to the culture medium at 37 鈩，

本文编号：2090519