染料木素衍生物对乳腺癌细胞增殖、迁移和侵袭的抑制及机制研究

发布时间：2018-07-21 14:14

【摘要】：目的:研究染料木素衍生物WH-20对人MCF-7乳腺癌细胞增殖、迁移及侵袭的影响,并且初步探讨其机制研究,为抗乳腺癌新药研究提供新思路。方法:1.MTT法检测染料木素衍生物WH-20对体外培养人MCF-7乳腺癌细胞增殖抑制的量效性和时效性、经Notch阻断剂(DAPT)、ERa阻断剂(MMP)和ERβ阻断剂(PHTPP)干扰后染料木素衍生物WH-20处理的MCF-7细胞的增殖影响;平板克隆检测WH-20对人MCF-7乳腺癌细胞克隆形成能力;流式细胞术检测WH-20对人MCF-7乳腺癌细胞周期的影响。2.采用基质胶黏附实验、划痕实验以及Transwell实验观察不同浓度WH-20对细胞的迁移和侵袭的影响;以及经Notch阻断剂(DAPT)、ERa阻断剂(MMP)和ERβ阻断剂(PHTPP)干扰后染料木素衍生物WH-20处理的MCF-7细胞的迁移和侵袭的影响。3.Western Blot检测不同浓度的WH-20对MCF-7细胞中周期蛋白Cyclin D1、迁移侵袭相关蛋白MMP9和VEGF的蛋白、ERa和ERβ以及Notch信号相关蛋白Notch1,Jagged1,NF-κBp65,IκBa的蛋白表达;以及经Notch阻断剂(DAPT)、ERa阻断剂(MMP)和ERβ阻断剂(PHTPP)干扰后WH-20对MCF-7细胞ERa,ERβ,Notch1,Jagged1,NF-κBp65,IκBa,Cyclin D1,MMP9和VEGF蛋白表达。4.Autodock软件分析WH-20对ERa和ERβ蛋白结合能力。结果:1.人MCF-7乳腺癌细胞经10、20、40mM的WH-20处理后均能够抑制细胞的增殖,且随着时间的增加显示时间依赖性,能够使细胞周期从G1期进入S期受到阻滞,且能够抑制细胞周期蛋白Cyclin D1的表达。2.浓度为10、20、40mM的WH-20能够抑制MCF-7乳腺癌细胞基质黏附、迁移和侵袭,降低MMP9和VEGF蛋白的表达。3.WH-20能够降低Notch信号通路相关蛋白Notch1,Jagged1,NF-κBp65,IκBa的表达。加入Notch阻断剂(DAPT)后能够加强WH-20对MCF-7乳腺癌细胞增殖、基质黏附、迁移和侵袭抑制作用,且Notch1,Jagged1,NF-κBp65,IκBa,Cyclin D1,MMP9和VEGF蛋白表达抑制作用加强。4.Autodock软件分析打分数均大于4成功模拟WH-20与ERa和ERβ蛋白结合能力,打分数分别为7.19和6.21。WH-20能够增加ERa和ERβ蛋白的表达。加入ERa阻断剂(MPP)后能够加强WH-20对MCF-7乳腺癌细胞增殖、基质黏附、迁移和侵袭抑制作用,且ERa,Notch1,Jagged1,NF-κBp65,IκBa,Cyclin D1,MMP9和VEGF蛋白表达抑制作用加强;加入ERβ阻断剂(PHTPP)后够减弱WH-20对MCF-7乳腺癌细胞增殖、基质黏附、迁移和侵袭抑制作用,且ERβ,Notch1,Jagged1,NF-κBp65,IκBa,Cyclin D1,MMP9和VEGF蛋白表达抑制作用减弱结论:WH-20能够抑制人MCF-7细胞增殖和迁移侵袭,主要分子机制是通过激活ERβ受体,抑制Notch信号相关蛋白表达,从而抑制与肿瘤细胞生长有关的Cyclin D1表达,迁移侵袭有关的MMP9和VEGF的表达;WH-20通过与ERβ结合调控Notch信号抑制人MCF-7肿瘤细胞的增殖和迁移侵袭。
[Abstract]:Objective : To study the effects of genistein on proliferation , migration and invasion of MCF - 7 breast cancer cells . Conclusion : WH - 20 can inhibit the proliferation and migration of human MCF - 7 cells . The main molecular mechanism is to inhibit the proliferation and migration of human MCF - 7 cells . The main molecular mechanism is to inhibit the expression of cyclin D1 related to tumor cell growth and the expression of VEGF . WH - 20 can inhibit the proliferation and migration of human MCF - 7 tumor cells by regulating Notch signaling with ER尾 .
【学位授予单位】：南华大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2016
【分类号】：R737.9

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本文编号：2135790