抗人Her2抗原羊驼纳米抗体的筛选与鉴定

发布时间：2018-07-27 18:39

【摘要】：目的获得靶向人Her2纳米抗体。方法使用重组人Her2蛋白免疫羊驼,分离免疫后羊驼的淋巴细胞提取总RNA,利用PCR技术扩增羊驼Ig G的可变区(VHH)基因片段,构建噬菌体表面展示的纳米抗体文库,采用Her2抗原对文库进行亲和筛选,将筛选到的克隆转化大肠杆菌BL21(DE3),IPTG诱导表达重组蛋白,镍离子亲和层析柱纯化获得纳米抗体并用ELISA技术和Biacore检测其与抗原Her2的亲和力,采用免疫组化方法检测Her2阳性乳腺癌组织中Her2的表达。结果第二轮筛选后得到2个抗体H3和H5,ELISA结果显示两者都具有抗原结合活性,其中H5的亲和力达8.106×10~(-10)mol/L。H5可识别乳腺癌组织中Her2抗原的表达。结论从Her2免疫的羊驼体内,通过噬菌体展示技术筛选获得了1个具有较高抗原结合活性的抗Her2纳米抗体,可用于乳腺癌的病理诊断。
[Abstract]:Objective to obtain the target human Her2 antibody. Methods the recombinant human Her2 protein was used to immunize alpaca. The total RNAs were isolated from the lymphocytes of alpaca after immunization. The variable region (VHH) gene fragment of Ig G was amplified by PCR technique, and the phage surface displayed nano-antibody library was constructed. The Her2 antigen was used to screen the library, and the selected clones were transformed into E. coli BL21 (DE3) to induce the expression of recombinant protein. The nano-antibody was purified by nickel ion affinity chromatography column and its affinity to Her2 antigen was detected by ELISA and Biacore. Immunohistochemical method was used to detect the expression of Her2 in Her2 positive breast cancer tissues. Results after the second round of screening, two antibodies H3 and H5 showed antigen-binding activities. The affinity of H5 to 8.106 脳 10 ~ (-10) mol/L.H5 could recognize the expression of Her2 antigen in breast cancer tissues. Conclusion A high antigen-binding antibody against Her2 was obtained from alpaca immunized with Her2. It can be used in the pathological diagnosis of breast cancer.
【作者单位】： 滨州医学院药学院;山东绿叶制药有限公司;山东国际生物科技园发展有限公司;
【分类号】：R737.9

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