肿瘤相关自身抗体及microRNAs联合检测在食管鳞癌中的诊断价值

发布时间：2018-08-11 17:17

【摘要】：食管癌是世界上常见的一种消化道恶性肿瘤。在中国,食管鳞状细胞癌(食管鳞癌,esophageal squamous cell carcinoma,ESCC)是食管癌最主要的组织学类型。河南是中国食管鳞癌的高发区之一,而且是病死率最高的地区。由于食管癌起病隐匿,其早期症状多因不典型而易被忽略,以致大多数患者常常拖延至中晚期才被发现。近年来,大量研究表明,肿瘤患者血液循环中不仅存在大量的肿瘤相关抗原(tumor associated antigens,TAAs)及其自身抗体(即肿瘤相关自身抗体,tumor associated autoantibodies,TAAbs),也存在多种microRNAs(miRNAs),它们可在患者体内稳定表达,并且在不同肿瘤中的表达谱不同,因此,可作为新的非侵入性肿瘤标志物用于食管鳞癌的诊断。目的本研究通过检测七种TAAbs(anti-HCCR-1、anti-p53、anti-p62、anti-C-myc、anti-NICD、anti-hnRNP A2/B1和anti-MDM2)和两种miRNAs(mi R-21和miR-25)在食管鳞癌患者和正常对照血浆中的表达水平,来评价这两类肿瘤标志物对食管鳞癌的诊断价值,从而为实现食管鳞癌的早发现、早诊断和早治疗提供理论依据。方法1.HCCR-1重组蛋白的表达和纯化:将预先构建好的HCCR-1重组质粒(pET-30a(+)-HCCR-1)转化到大肠杆菌BL21(DE3)化学感受态细胞中进行诱导表达,然后运用镍离子亲和层析法对表达的HCCR-1目的蛋白进行纯化,并采用Bradford法测定其浓度。2.收集医院来源的新发食管鳞癌患者的血浆125例,并按照性别和年龄进行匹配,收集同时期参加体检的健康对照者的血浆125例。3.采用间接酶联免疫吸附试验(enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA)检测所有受试对象血浆中七种TAAbs的相对表达水平。4.采用实时荧光定量逆转录聚合酶链反应(real-time quantitative reverse transcription polymerase chain reaction,qRT-PCR)检测所有受试对象血浆中miR-21和mi R-25的相对表达水平。5.采用t检验比较TAAbs和miRNAs在食管鳞癌患者和正常对照个体血浆中相对表达水平的差异;采用卡方检验或Fisher确切概率法比较TAAbs和miRNAs与食管鳞癌患者临床基本特征之间的关系;分别采用t检验和方差分析比较两组和三组间TAAbs和miRNAs在食管鳞癌患者血浆中的表达水平是否有差异;采用诊断试验的评价方法,评价单个指标单独检测及多个指标联合检测对食管鳞癌的诊断价值;采用ROC(receiver operating characteristic)分析计算不同指标及其组合诊断食管鳞癌时在该曲线下的面积(area under the ROC curve,AUC)。结果1.成功表达并纯化出HCCR-1重组蛋白,其浓度为0.28 mg/mL。2.七种TAAbs的ELISA结果显示,除anti-NICD和anti-hnRNP A2/B1外,其余五种TAAbs(anti-HCCR-1、anti-p53、anti-p62、anti-C-myc和anti-MDM2)在食管鳞癌组的表达水平明显高于对照组中的表达水平(均有P0.05)。3.单个TAAb用于食管鳞癌诊断的灵敏度为7.2% 23.2%,特异度为93.6% 97.6%,AUC为0.522 0.728,诊断价值较低;以灵敏度最大的anti-MDM2为起点,逐渐并联检测多种TAAbs时,灵敏度可从23.2%升至60.8%,而AUC可达0.805。4.血浆中TAAbs的表达水平在不同性别、年龄及TNM分期(包括T、N和M分期)食管鳞癌患者中的分布均无统计学差异(P0.05)。5.qRT-PCR结果显示,miR-21在食管鳞癌组的含量均明显高于对照组中的含量(P0.001),而miR-25的含量则在两组间的变化无统计学意义(P0.05);ROC分析表明,miR-21对食管鳞癌诊断的灵敏度为74.4%,特异度为77.6%,AUC为0.804。6.miR-21和miR-25在血浆中的分布均与食管鳞癌患者的性别、年龄和M分期无关(P0.05),而与TNM分期和T分期密切相关(均有P0.01):miR-21和miR-25在0-I期的表达水平明显高于II期(分别为P0.001,P=0.043)和III-IV期(分别为P0.001,P=0.017),在Tis-T1期的表达水平高于T2期(分别为P=0.003,P=0.037)和T3期(分别为P0.001,P=0.004);miR-21的分布与N分期无关(P0.05),而miR-25在N分期上的分布的差异具有统计学意义(P0.001)。7.ROC分析显示,miR-21和miR-25对0-I期食管鳞癌患者的AUC分别为0.857和0.627,对Tis-T1期食管鳞癌的AUC分别为0.842和0.656。8.不同组合中,五种TAAbs(anti-HCCR-1、anti-p53、anti-p62、anti-C-myc和anti-MDM2)与miR-21进行联合检测对食管鳞癌的诊断价值最高,其AUC为0.869,灵敏度和特异度分别为76.8%和84.8%;对0-I期食管鳞癌患者的AUC为0.889,对Tis-T1期食管鳞癌的AUC为0.882。结论1.血浆中的五种TAAbs(anti-HCCR-1、anti-p53、anti-p62、anti-C-myc和anti-MDM2)和miR-21是食管鳞癌的潜在诊断标志物。2.所有TAAbs在血浆中的分布均与食管鳞癌的性别、年龄和TNM分期无关,而miR-21和mi R-25的分布均与性别和年龄无关而与TNM分期有关。3.血浆miR-21和mi R-25的检测有助于食管鳞癌的早期诊断。4.五种TAAbs与miR-21联合检测对食管鳞癌的诊断价值较高,尤其是早期食管鳞癌。
[Abstract]:......
【学位授予单位】：郑州大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2017
【分类号】：R735.1

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本文编号：2177688