LCNEC中SCGN表达及EGFR突变的肺腺癌中Rb和pRb的表达研究

发布时间：2018-10-04 19:39

【摘要】：肺癌是目前中国人癌症死亡的最主要原因,针对肺癌的早期诊断、早期治疗,精准靶向治疗等是目前的研究热点。本论文主要分为两部分,第一部分:大细胞肺癌作为肺癌的的一种少见类型,其发生率低,诊断困难,其生长迅速,全身转移发生早,预后较其他类型的非小细胞肺癌差,因此提高大细胞肺癌的临床诊断具有十分重要的意义。大细胞肺癌是指不具有鳞癌、腺癌、小细胞肺癌的病理特点的非小细胞肺癌。Syn、CD56和Cg A等病理标志物来区分大细胞神经内分泌癌及大细胞非神经内分泌癌,但是诊断的敏感性,准确性不高。Secretagogin(SCGN)是一种在消化系统肿瘤中新发现的标志物,研究发现其联合临床经典Maker可以提高诊断的准确率。但是在大细胞神经内分泌癌中表达情况的研究不多。本研究中,我们检测33例大细胞肺癌以及肺癌细胞系中SCGN的表达,并进一步分析SCGN表达阳性的患者其临床特征,探讨其作为新的神经内分泌标志物对大细胞肺癌的检测的可能。第二部分:表皮生长因子受体基因作为肺腺癌重要的驱动基因,在肺癌的发生发展中起着重要的作用。EGFR酪氨酸激酶抑制剂具有肿瘤抑制作用。在具有EGFR突变的NSCLC患者中,使用EGFR-TKI疗效优于传统的化疗,且毒副作用小,病人耐受性好。而Rb是人体内重要的抑癌基因,通过控制细胞周期的进程,抑制细胞的过度增殖。Rb-E2F信号通路是调控细胞周期的关键信号分子和通路,通常情况下,Rb与E2F1结合,使E2F1没有活性,但在肿瘤中经常有各种因素导致Rb失活,使细胞增殖,导致肿瘤发生。多项研究已经证实,在肺癌中普遍存在Rb蛋白的表达异常。比如,有研究显示非小细胞肺癌中约20%-40%存在Rb蛋白表达降低。因此Rb的异常普遍存在于肺癌中,是肺癌重要的发病因素。我们通过免疫组化检测23例EGFR突变的肺腺癌患者标本中Rb、pRb-780和pRb-795的表达情况,分析与患者的临床信息的关系,探讨使用细胞周期抑制剂是否能有效抑制EGFR突变细胞的恶性增殖。第一部分:(1)首先在用Western Blot检测A549、H661、H1650、H292、H358、HEK293、3T3细胞系中SCGN、Cg A、Syn、CD56的表达,结果示Syn,SCGN与Cg A在H1650中高表达,在H358,H292以及H661中均呈低表达或者不表达,具有一定的相关性,CD56仅在A549细胞系中高表达。(2)我们进行细胞免疫组化染色进一步验证肺癌细胞系中SCGN的表达情况以及表达位置,结果提示:SCGN在免疫组化中染色结果与免疫蛋白印迹的结果是一致的。在HEK293以及A549中高表达,并在细胞核以及细胞质中表达。进一步在A549细胞系中对四种Maker进行免疫荧光共定位检测,结果示在A549细胞中存在共定位表达。(3)我们通过免疫组化以及免疫荧光验证在33例既往术后诊断为大细胞肺癌值标本中SCGN的表达以及与其他三种Maker的表达位置关系。在17例LCNEC患者中有16例呈SCGN阳性表达,16例大细胞肺癌患者中只有2例阳性(p0.001)。说明SCGN的表达与大细胞神经内分泌癌显著相关且SCGN与Cg A、Syn、CD56在大细胞肺癌中表达具有一致性(p=0.001,p=0.003和p=0.019);分析SCGN蛋白的表达与性别、年龄、吸烟状况、转移状态和临床分期,未见相关性。免疫荧光结果示SCGN与Cg A,Syn和CD56在肿瘤组织细胞中共定位表达,同时SCGN表达的范围以及染色强度要明显高于其他的标志物。第二部分:在23例EGFR突变的肺腺癌患者的癌组织和肺癌周围的正常肺组织中,分别进行Rb,pRb-780,pRb-795的免疫组化染色。结果示:(1)69.6%(16/23)的患者存在Rb表达降低/缺失,73.9%(17/23)的患者存在pRb-780染色增强,69.6%(16/23)患者存在pRb-795的过表达。(2)Rb的表达情况与患者临床病理生理特征分析后发现,在不同年龄、性别、吸烟史、临床分期、肿瘤位置及不同的EGFR突变位点的患者中未见显著性差异。(3)进一步分析Rb,pRb-780,pRb-795的表达与患者临床信息的关系,在肺癌中Rb的表达情况与患者临床病理生理特征分析后发现,与年龄、性别、吸烟史、临床分期、肿瘤位置及不同的EGFR突变位点没有显著性差异;(4)pRb-780蛋白在III期/IV期患者中与I期/II期患者相比,pRb-780蛋白过表达率更高,差异有统计学意义(P=0.022);pRb-795在I期/II期患者相比,III期/IV期有更多的患者存在过表达,但是差异不显著(P=0.074);结论:1.SCGN在肺癌细胞系以及大细胞肺癌组织中高表达,且SCGN与CD56,Cg A,Syn,存在共定位表达;SCGN表达的阳性率,染色程度明显高于其他的神经内分泌标志物,提示SCGN可以单独或者联合其他的标志物用于神经内分泌肿瘤的诊断。2.在EGFR突变的肺腺癌患者中,Rb的表达缺失/减弱或过度磷酸化;Rb功能异常可能是EGFR突变肺腺癌患者中存在的重要发病机制。
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【学位授予单位】：天津医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2017
【分类号】：R734.2

【参考文献】