【摘要】：背景及意义卵巢癌作为一种恶性程度极高的妇科肿瘤,预后不良,大多数患者就诊时已为晚期,并且70%左右的卵巢癌患者会在两年内肿瘤复发。目前,卵巢癌的主要治疗方法是以手术为基础,联合辅助化疗。随着卵巢癌腹腔镜手术及机器人辅助手术、辅助化疗的改进,一定程度上改善了卵巢癌患者的围手术期效果及预后,但由于化疗药物的毒副反应及耐药性的存在,多数卵巢癌患者经过初始治疗后会出现化疗耐药、肿瘤复发、广泛转移等,甚至导致患者死亡。晚期卵巢癌5年生存率小于30%。几乎所有的患者都会产生原发性或获得性的化疗耐药,而发生化疗耐药的卵巢癌患者的治疗非常棘手,严重影响患者生存质量。因此,探索新的改善卵巢化疗敏感性的治疗方法,提高卵巢癌患者的无进展期和总生存期,已刻不容缓。泛素特异性蛋白酶39(ubiquitin specific peptidase 39,USP39)基因位于人染色体2p11.2,调节纺锤体组装检查点和有丝分裂,参与mRNA剪切及剪切小体的组成,在细胞有丝分裂中维持纺锤体检验点完整性,确保细胞成功有丝分裂,也参与了肿瘤的发生与发展。已有文献报道,卵巢癌的发生、发展与USP2、USP7、USP14等有密切关系。Liu S等发现USP39抑制乳腺癌细胞的凋亡,促进乳腺癌的发生、侵袭、转移,影响乳腺癌患者预后。也有文献报道,USP39与肝癌、甲状腺髓样癌、口腔鳞状细胞癌、肺癌、前列腺癌、结直肠癌、胃癌、食管癌的增殖和凋亡有关。本课题组前期研究发现,USP39基因在卵巢癌组织中表达升高,体内及体外实验中发现,USP39可促进卵巢癌细胞增殖、侵袭、转移,并抑制细胞凋亡。USP39基因参与该过程可能是通过调控Aurora B基因的表达,影响PI3K/AKT信号通路活性实现的。然而,USP39是否参与卵巢癌顺铂化疗耐药目前还无相关研究,卵巢癌顺铂化疗耐药细胞中USP39是否高表达、沉默USP39表达是否可改善卵巢癌化疗耐药等问题仍然不是很清楚。本研究旨在为改善卵巢癌患者顺铂化疗耐药提供一个新的思路。目的检测USP39基因在顺铂耐药细胞株OVCAR-3/DDP及其亲本敏感细胞株OVCAR-3中的表达差异,USP39-siRNA转染OVCAR-3/DDP细胞沉默USP39基因表达,分析USP39基因沉默后卵巢癌细胞增殖及对顺铂化疗敏感性的变化,为临床上逆转卵巢癌化疗耐药提供一个新的思路。方法1、应用反转录聚合酶链式反应和蛋白印迹方法检测USP39 mRNA和蛋白在OVCAR-3/DDP及OVCAR-3细胞中的表达情况。2、USP39-siRNA转染OVCAR-3/DDP细胞,反转录聚合酶链式反应和蛋白印迹方法检测转染后细胞中USP39基因的表达量。3、CCK-8法检测转染细胞的增殖情况及对顺铂化疗耐药性的变化。结果1、USP39在OVCAR-3/DDP细胞中mRNA的相对表达量是OVCAR-3细胞的(2.69±0.62)倍,蛋白表达量是OVCAR-3细胞的(2.21±0.53)倍,差异均有统计学意义(P0.05),提示USP39在卵巢癌顺铂化疗耐药细胞株OVCAR-3/DDP中的表达显著高于亲本细胞株OVCAR-3中的表达。2、USP39-siRNA转染OVCAR-3/DDP细胞后,以对照组(未转染组)OVCAR-3/DDP细胞内USP39的mRNA和蛋白水平为100%,USP39在实验组(USP39-siRNA转染组)OVCAR-3/DDP-USP39-siRNA细胞中的mRNA表达水平为(19.28±2.92)%,蛋白表达水平为(18.25±2.81)%,与OVCAR-3/DDP细胞组相比,差异均有统计学意义(P0.05)。USP39在空白组(USP39对照序列转染组)OVCAR-3/DDP-USP39-NC细胞中的mRNA表达水平为(102.07±3.73)%,蛋白表达水平为(99.14±1.29)%,与OVCAR-3/DDP细胞组相比,无显著差异(P0.05)。3、三组细胞分别和顺铂共同孵育24h、48h、72h后,与对照组OVCAR-3/DDP细胞及空白组OVCAR-3/DDP-USP39-NC细胞相比较,实验组OVCAR-3/DDP-USP39-siRNA细胞增殖速度明显降低、对顺铂的抑制率明显升高;与不同浓度的顺铂共同孵育后,空白组OVCAR-3/DDP-USP39-NC细胞(IC50=(182.09±20.17)μmol/L)与对照组OVCAR-3/DDP细胞(IC50=(191.33±32.53)μmol/L)相比,差异无统计学意义(P0.05),与实验组OVCAR-3/DDP-USP39-siRNA细胞组顺铂的IC50值为(47.24±3.17)μmol/L,,差异均有统计学意义(P0.05)。结论1、USP39基因在OVCAR-3/DDP细胞中的表达显著高于OVCAR-3细胞。2、沉默USP39基因表达可抑制OVCAR-3/DDP细胞增殖能力及改善顺铂化疗敏感性。3、USP39基因促进卵巢癌顺铂化疗耐药产生,可作为卵巢癌顺铂化疗耐药新的治疗靶点。
[Abstract]:......
【学位授予单位】：郑州大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2017
【分类号】：R737.31
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